环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和TERT表达的影响-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 万方数据 万方数据 环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和 TERT 表达的 影响 摘 要 缺血性脑血管疾病是严重威胁人类健康的常见疾病之一，在缺血 性 脑 血 管 疾 病 发 生 发 展 过 程 中 ， 会 发 生 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 (ischemia-reperfusion injury, IRI)，其严重影响疾病的治疗和预后，因 此加强对脑缺血再灌注损伤的病理生理机制及防治措施的研究成为 一项重要的医学课题。黄芪是一种被广泛应用于治疗缺血性脑血管病 的 传 统 中 药 ， 在 IRI 方 面 的 防 治 作 用 日 益 被 重 视 。 环 黄 芪 醇 (cycloastragenol,CAG)是黄芪有效部位黄芪甲苷的苷元，在体外实验 中被证实有显著的端粒酶激活作用，而端粒酶是一种内源性神经保护 措施，在脑缺血再灌注损伤中，过表达的端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase,TERT）能起到脑保护作用。环黄芪醇对脑缺血再 灌注损伤有无保护作用及其机制尚不明确。本研究通过建立脑缺血再 灌注损伤大鼠模型，术前给予环黄芪醇干预，通过检测大鼠神经功能 评分和脑梗死灶容积百分比，观察环黄芪醇对大鼠脑缺血再灌注损伤 的减轻作用；通过免疫组化和蛋白印迹法测定大鼠脑组织中 TERT 表 达的变化和 TUNEL 法检测神经元凋亡的情况，探讨环黄芪醇抑制神 经元凋亡、提高 TERT 的表达，从而减轻脑缺血再灌注损伤的分子机 制，为环黄芪醇防治脑缺血再灌注损伤提供依据。 第一部分 环黄芪醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的减轻作用 目的： 探讨环黄芪醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的减轻作用。 方法： 1 实验对象的分组与处理 选取 60 只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组，模型组，环黄芪醇 低剂量组（2.5 mg/kg/d）、中剂量组（5.0 mg/kg /d）、高剂量组（10 mg/kg /d）和血塞通对照组（20 mg/kg/d），每组 10 只。每天灌胃给 1 药 1 次，连续 7 天，第 7 天给药 1h 后进行造模，假手术组和模型组 给予等体积的 0.5%CMC-Na 混悬剂。 2. 局灶性脑缺血再灌注模型的制备 采用 Zea Longa 线栓法略做改良制作大鼠右侧大脑中动脉栓塞 （MCAO）模型，缺血 2h 后拔出线栓，再灌注 24h 后，进行各项指 标的检测。 3. 大鼠 Garcia JH 神经功能评分 再灌注损伤 24h 后，采用双盲法，按照 Garcia JH 大鼠神经功能 评分标准，进行神经功能评分。 4. 大鼠脑梗死灶容积百分比 再灌注损伤 24h 后处死大鼠，断头取脑，经 TTC 染色，拍照， 计算脑梗死灶容积百分比。 结果： 1. 环黄芪醇对大鼠 Garcia JH 神经功能评分的影响 与假手术组相比，模型组大鼠神经功能评分明显降低（P0.01）； 与 模 型 组 相 比 ， 环 黄 芪 醇 中 、 高 剂 量 组 的 神 经 功 能 评 分 均 升 高 （P0.05）；环黄芪醇低剂量组与模型组统计无差异（P0.05）。 2. 环黄芪醇对大鼠脑梗死灶容积百分比的影响 与假手术组相比，模型组大鼠脑梗死灶容积百分比显著升 高 （P0.01）；与模型组相比，环黄芪醇中、高剂量组、血塞通组脑梗 死灶容积百分比降低（P0.05）；环黄芪醇低剂量组与模型组统计无 显著性差异（P0.05）。 小结： 环黄芪醇能提高脑缺血再灌注大鼠的神经功能评分，减小脑梗死 灶容积百分比。环黄芪醇可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。 第二部分 环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和 TERT 表达的 影响 目的： 观察环黄芪醇对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和端粒酶逆转录 酶（TERT）表达的影响，探讨环黄芪醇减轻脑缺血再灌注损伤的作 2 用机制。 方法： 检测 TERT 蛋白的表达：将雄性 SD 大鼠随机分成 3 组：假手术 组、模型组、环黄芪醇组(10mg/kg/d)，除假手术组外，其余各组均进 行 MACO 造模，给药和造模方式同第一部分。在脑缺血再灌注 24h 后，以缺血侧脑皮质，半暗区为主要取材和观察部位，通过免疫组织 化学法和蛋白印迹法检测大鼠缺血侧皮质中 TERT 蛋白的表达。 检测神经元凋亡：将雄性 SD 大鼠随机分成 5 组：假手术组、模 型 组 、 环 黄 芪 醇 组 (10mg/kg/d) 、 端 粒 酶 抑 制 剂 叠 氮 胸 苷 (ATZ) 组 (20mg/kg/d) 、环黄芪醇 (10mg/kg/d)+ 端粒酶抑制剂 (ATZ) 组 (20mg/kg/d)。给药和造模方式同上，脑缺血再灌注 24h 后，通过 TUNEL 染色法检测大鼠缺血侧半暗带区神经元的凋亡