实验７果蝇唾腺染色体观察.ppt

* 实验７ 果蝇唾腺染色体观察 一、原理 唾腺染色体（ Salivary gland chromosome)是一类存在与双翅目昆虫，如果蝇、摇蚊幼虫唾腺细胞中的巨大染色体。双翅目昆虫的唾腺细胞发育到一定阶段后就不再进行有丝分裂，而永久停留在分裂间期。但随着幼虫的生长，唾腺染色体仍不断的进行自我复制而且不分开，经过多次的复制形成约1000-4000拷贝的染色体丝，合起来直径达5μm ，长度达400 μm，比普通细胞中期染色体约大100-150倍，所以又称为多线染色体（polytene chromosome)或巨大染色体（giant chromosome)。 另一特点是体细胞中同源染色体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋白纤维丝结合在一起，紧密盘绕。所以细胞中染色体呈单倍数。 二、目的 学习果蝇唾腺染色体的制片技术，观察其大小、形态、横纹等特征。了解其与染色体结构畸变的关系。 三、材料 黑腹果蝇（黑檀体）的三龄幼虫 四、步骤 1、选取行动迟缓，身体肥大的三龄幼虫，先在载玻片上滴3-4滴0.7%的生理盐水依次刷洗身体，再转入另一张载片1滴0.7%的生理盐水中，左手持一支解剖针按住幼虫尾部1/3处，右手持另一支解剖针按住幼虫头部口器部位稍后（唾液腺基部位置处）并往外拉，将头部从身体拉开，此时一对透明的棒状腺体-唾液腺随之而出。 2、用解剖针剥离唾液腺上附着的白色（或灰色）脂肪体，先小心吸去生理盐水，再加入1滴0.1N HCl处理30 秒，小心吸去HCl，用ddH2O浸洗２次，小心吸去水分。 ３、加入１－２滴改良的苯酚品红，染色１０分左右，当腺体被染上色后，即可加盖片，然后在盖片上覆一小块吸水纸，用解剖针柄端轻轻敲打压片（或用拇指轻轻横向揉压压片），压片时勿使盖片与载片间发生相对滑动。 ４、先在低倍镜下观察唾液腺染色体的整体形态，找到分散良好的唾液腺染色体后，转高倍镜观察。 五　作业 　绘出所观察到的唾液腺染色体图象。 注意事项: 1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 将脂肪组织清除干净 3. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 4. 染色时间不可过长，否则背景也着色 5. 压片时用力要均匀 6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片 7. 吸水时勿将唾腺一起吸走 Supplemental data 果蝇唾腺染色体特点： 巨大，是多线染色体； 正常：间期DNA复制 两条染色单体 着丝点裂开 子染色体 核分裂 胞质分裂 果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，DNA不断自我复制，着丝点不 裂开 同源染色体紧密配对：体细胞联会，所以染色体只呈现单倍数；形成染色中心，从染色体中心处伸出5条长臂，1条短臂；染色后，出现一系列宽窄不同、染色深浅不一的横纹； 果蝇唾腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线多达500～1000条，其长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。 由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。 利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，还可以结合遗传实验结果进行基因定位。此外，由于其体细胞同源染色体的配对，故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。 唾腺的剥离： 1. 2 　试　剂 (1) 0. 7 %的生理盐水 (2) 0. 2 mol/ L HCL (3) 蒸馏水 (4) 染色液:改良苯酚品红染液 　1.1实验材料的选择及培养 选取强壮的长翅果蝇和黑檀体果蝇培养三龄幼虫,并进行低温处理。即24 ℃培养,待有大量幼虫出现后,再转入13 ℃下处理24 h ,再转入22 ℃培养箱内培养,使幼虫充分发育。 1. 3a 　操作步骤 (1) 在载玻片上先加一滴生理盐水,取肥大的果蝇三龄幼虫置于其中,分清幼虫的头和尾。左手持镊子,右手持解剖针,用镊子夹住虫体中部稍后处,不使其移动,右手持解剖针按在幼虫的口器即黑色小点处,水平往前移,唾腺即随之拉出。这时可看到一对透明而微白的长形小囊即唾腺,常在一侧附一条白色脂肪。 在拖取唾液腺时必须将幼虫浸在滴有一滴生理盐水的载玻片上,否则唾液腺即使完整脱出来,但由于缺少水分,唾液腺会因为干燥粘在玻片上而被破坏掉。 (2) 杂质的剥离:滴一滴0. 2 mol/ L 的HCL 于果蝇唾腺上,解离1～2 min ,用解剖针轻轻拨动,脂肪等杂质