禾谷镰刀菌Homeobox转录因子Htf1缺失突变体差异表达蛋白鉴定及其功能分析-生物学;生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的 研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的 地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献 的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行 为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送 交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采 用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 必威体育官网网址，在 年后解密可适用本授权书。 □ 不必威体育官网网址，本论文属于不必威体育官网网址。 □ 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 指导教师亲笔签名： 日期： 目 录 摘要 1 Abstract 2 1 引言 3 1.1 禾谷镰刀菌研究概况 3 1.1.1 禾谷镰刀菌形态学特征 3 1.1.2 禾谷镰刀菌引起的病害及病害循环 3 1.1.3 禾谷镰刀菌产生毒素的研究进展 4 禾谷镰刀菌产生的毒素及其影响 4 禾谷镰刀菌产毒过程中分子生物学方面的研究 6 Homeobox 基因研究概况 8 Homeobox 基因的发现 8 Homeobox 基因的分类 8 Homeobox 基因的结构特征 9 1.2.4 Homeobox 基因在不同物种中的功能 10 动物中的 Homeobox 基因 10 植物中的 Homeobox 基因 10 菌物中的 Homeobox 基因 11 1.3 本研究的目的和意义 11 2 材料与方法 12 2.1 试验使用的菌株、实验试剂和培养基等材料 12 2.1.1 供试菌株 12 2.1.2 致病性鉴定材料 12 2.1.3 培养基 12 2.1.4 抗生素 12 2.1.5 用于双向电泳的生化试剂 12 2.1.6 用于基因敲除的生化试剂 14 2.2 实验方法 14 2.2.1 样品的收集，总蛋白的提取（TCA/丙酮法）及定量检测（Bradford 法）...14 样品的收集 14 总蛋白的提取 14 总蛋白的裂解 15 总蛋白的定量 15 2.2.2 总蛋白双向电泳 16 第一向 等电聚焦（IEF）电泳： 16 管胶的平衡 17 第二向 SDS电泳 17 二向胶的染色（G250 考染） 18 差异点的确定以及蛋白点的挖取 18 2.2.3 Htf1 相关基因的功能分类 19 2.2.4 Htf1 相关基因的敲除 19 禾谷镰刀菌基因组 DNA 的提取 19 运用 PCR 扩增 A、B 片段和 HY、YG 片段 19 SOE-PCR 扩增长片段 AH、HB 20 PCR 产物的胶回收 20 禾谷镰刀菌原生质体制备 21 禾谷镰刀菌原生质体的转化 21 2.2.5 Htf1 相关基因缺失突变体的表型观察 22 生长速率测定 22 产孢量的测定 22 2. 2.5.3 植物致病性测定（小麦麦穗接种） 22 3 结果与分析 23 3.1 敲除突变体的蛋白组学分析 23 TOC \o 1-1 \h \z \u HYPERLINK \l _TOC_250004 3.2 用 MALDI-TOF-TOF MS 鉴定出差异蛋白 25 HYPERLINK \l _TOC_250003 3.3 禾谷镰刀菌 Htf1p 相关基因敲除突变体的筛选与鉴定 29 HYPERLINK \l _TOC_250002 3.4 Htf1p 相关基因缺失突变体对禾谷镰刀菌营养生长的影响 29 HYPERLINK \l _TOC_250001 3.5 Htf1p 相关基因缺失突变体对禾谷镰刀菌致病性的影响 30 HYPERLINK \l _TOC_250000 3.6 Htf1p 相关基因缺失突变体对产孢量的影响 31 4 全文总结讨论及后续研究 33 附录 1 本研究中所采用的引物序列及其用途 38 附录 2 本研究中双向电泳的其他重复 43 附录 3 差异蛋白在野生型 PH-1 和ΔFgHtf1 中的蛋白表达水平 43 参考文献 46 致谢 54 福建农林大学硕士学位论文 摘要 主要由禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）引起的小麦赤霉病是一种在全世界范围 内对粮食作物有毁灭性作用的病害，该病害主要通过孢子来进行传播和扩散。已有结果表 明，在稻瘟病菌中同源异型盒转录因子 Htf1 调控分生孢子的产生，在镰刀菌属中 Htf1 也 是瓶梗发育和产孢过程所必须的。为此，本研究进一步运用 2-D