GB 29989-2013食品安全国家标准　婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定.pdf

中华人民共和国国家标准 GB 29989—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定 2013-11-29发布 2014-06-01实施 GB29989—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定。 2 原理 试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液经碱皂化后使溶液中结合态的左旋肉碱游离 出来。左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的 辅酶A和2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A 与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱含量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 高氯酸(HClO)。 4 3.1.2 氢氧化钠(NaOH) 。 3.1.3 氢氧化钾(KOH) 。 3.1.4 2-硝基苯甲酸(C HN O S)。 14 8 2 8 2 3.1.5 N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(CH N O S)。 8 18 2 4 3.1.6 乙二胺四乙酸二钠（C H N Na ·2H O）。 10 14 2 2 2 3.1.7 乙酰辅酶A （AcetylCoA）：在2℃~8℃保存。 3.1.8 乙酰肉碱转移酶(CAT)：在2℃~8℃保存。 3.2 试剂配制 3.2.1 高氯酸溶液（13%）：13mL高氯酸稀释至100mL。 3.2.2 氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取40g氢氧化钠用水溶解，冷却后稀释至100mL。 3.2.3 氢氧化钾溶液（4.0mol/L）：称取22.4g氢氧化钾用水溶解，冷却后稀释至100mL。 3.2.4 显色储备液：分别称取50mg2-硝基苯甲酸、5.96gN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸、185mg 乙二胺四乙酸二钠溶 30mL去离子水中，用10mol/LNaOH溶液调pH至7.4～7.6，然后用水定容 至50mL。此液置 4℃冰箱中可保存3个月。 3.2.5 显色工作液：吸取5.0mL显色储备液用水定容至25mL。 3.2.6 乙酰辅酶A （AcetylCoA）溶液：称取20.0mg 乙酰辅酶A溶 2.0mL水中。临用时配制。 1 GB29989—2013 3.2.7 乙酰肉碱转移酶(CAT)溶液：吸取100µL 乙酰肉碱转移酶悬浮液，经1500r/min离心10min， 弃去上层清液，沉淀用2mL水溶解。临用时配制。 3.3 标准品 左旋肉碱标准品（CH NO ）：纯度≥98%。 7 15 3 3.4 标准溶液配制 3.4.1 左旋肉碱标准储备液 （80µg/ L）：准确称取20mg （精确0.0001g） 102℃±2℃烘箱中烘 2h 的左旋肉碱，用水定容至250mL容量瓶中。此液置 4℃冰箱中可保存 1个月。 3.4.2 左旋肉碱标准工作液：分别吸取左旋肉碱标准储备液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL 25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此溶液仅限于当天使用。 4 仪器和设备 4.1 分析天平：感量0.1mg。 4.2 pH计：精度0.01。 4.3 离心机：转速≥1500r/min。 4.4 恒温水浴锅：温度可控制在40℃±2℃。 4.