课件：霍乱病原菌检测标本的采集方法、运输和保存.ppt

重庆市南岸CDC 许 磊 ： （一）标本采集和送检的要求 标本采集是否规范，能从很大程度上影响检验工作的质量。标本采集应由受过专门培训的人员来执行，同时注意生物安全防护，防止样品污染、交叉污染和自身感染。标本应有唯一编号作为唯一性标识。标本在采集后应立即放入冷藏箱中，注意勿使标本局部冷冻，并尽快送往实验室进行分离培养。 送检标本时应填写“标本送检单”（样单见附表2和3），写明姓名、住址、联系方式、发病时间、采集时间、临床诊断等，为环境和食品标本等时，也需要记录采集时间、地点、种类等相关信息。标本管/袋或瓶上标记样品编号。因病人标本含有病原体，标本装入试管或小瓶时，注意勿污染容器口外壁，必须妥善包装以防破碎、渗漏等，放在坚固的送检箱内由专人送往检验室，运送过程中注意安全。送检箱每次用后须经消毒处理。 病人标本应尽可能采集粪便。根据调查需要以及标本的可及性，如下标本也作为检材：病人呕吐物、尸体肠内容物、粪便污染衣物及相关物体表面如地面、水体、食品、水生动物、苍蝇等，但根据实际情况，也不限于这些标本。标本转运培养基配方见附件3“常用的标本保存液和细菌培养基”。 * 1. 病人粪便 粪便标本的采集应尽可能在发病早期（能采集到的最早期）。即便病人已使用抗生素，为尽可能获得霍乱病原学诊断，也需在能采集的最早期采集标本。用采集粪便标本（包括水样便）的器材采取新鲜粪便，避免采便量过少，一般要求水样便采取1mL～3mL，放入无菌带螺旋盖的试管中，拧紧管盖；成形便采取指甲大小的粪量，装入灭菌小瓶中，盖好瓶盖。 如病人不能自然排出大便、可使用肛拭或肛门采便管采集。用棉拭子（用于PCR检测的标本，不要使用棉拭子而应使用灭菌人造纤维拭子或塑料棒采集）或肛门采便管先在灭菌生理盐水中蘸湿后（棉拭子贴管壁挤出多余的液体），由肛门插入直肠内3cm～5cm（幼儿约2cm～3cm）处，旋转360°，自肛管内壁表面拭取采集。应注意棉拭子大小是否适宜、光滑、结实且不易脱落。然后立即置于冷藏箱内，送往实验室。肛拭子标本如不能在2h内送达实验室，应插入Cary-Blair运送培养基运送，注意培养基应埋住粪便拭子，手接触的部分在管口折断弃去。 粪便标本如果运送时间不超过24h，还可将其放在碱性蛋白胨水中室温运送。标本与碱性蛋白胨水的比例为8mL～10mL碱性蛋白胨水可加入1mL～3mL液体便或指甲大小的成形便。过多的粪便量会降低保存液的pH值。如果没有合适采便器材以及没有运送培养基时，可用无菌吸水纸条浸于液体粪便中，然后将吸水纸条密封于塑料袋中，放入冷藏箱中运往实验室。 2. 病人呕吐物 用无菌压舌板或棉拭子挑取少量呕吐物作为检材，放入灭菌塑料管、自封塑料袋或灭菌带盖瓶中，密封。立即置于冷藏箱内，送往实验室 . 3. 水体 包括河口水、江河水、沟渠水、池塘水、湖水、井水、港湾海水、乡镇自来水厂源水、医院污水排放口、下水道排放口、海水产品养殖水、海水产品交易市场的出水口等。需要时也可采集水体的底泥作为检材。 水样标本的采集方法有多种，各实验室应根据现场流行病学调查需要及实验室自身检测条件，如有无过滤器等，作相应的选择。 (1) 盐水瓶法 (2) Moore纱布集菌法 (3) Spira 纱布集菌法 4. 食品 针对不同的可疑食品，采集整体或部分标本，带至实验室。注意采集过程中不同食品及不同部位不能交叉污染。 5. 海水产品 选取活海水产品或涂抹拭子，置于塑料袋内（拭子标本可按粪便拭子保存运输方法处置），尽快送往实验室。如在一箱甲鱼中可采取数只甲鱼的体表作为一个标本送检，这比只做一只甲鱼体内检查其阳性检出机会可能更多。霍乱监测时，海水产品常作为重点采集监测的对象。注意采集过程中不同食品及不同部位不能交叉污染。 6. 物体表面标本 用灭菌棉拭蘸以碱性蛋白胨水涂擦沾染粪便的衣物表面、食物操作台、砧板等等相关物体或怀疑污染物体表面，放入到碱性蛋白胨水中，密封，常温下运往实验室。 7. 苍蝇标本 在每个采样点以10～15只苍蝇作为一份标本放入自封袋或试管中，密封，置于冷藏箱中送实验室。 霍乱属于肠道传染病，对实验室操作以及样品采集等方面的生物安全应按照肠道感染细菌性疾病的通用生物安全要求。另外，霍乱在我国属于传染病法规定的甲类报告管理传染病，在卫生部《人间传染的病原微生物名录》（2006年）中，霍乱弧菌流行株危害程度为第二类，属于高致病性微生物级别（非流行株危害程度为第三类），要求在生物安全II级实验室（BSL-2）操作病原体。 对于霍乱疫情或疑似霍乱疫情的现场调查和样本采集过程中，必须注意生物安全防护，调查采样人员应咨询实验室人员，做好个人防护以及避免采集标本过程中的感染以及标本再污染其他物品和环节。 附表2 霍乱病例/带菌者/接触者粪便标本时 医