课件：超敏反应性疾病的免疫学检验.ppt

第四节 抗球蛋白试验（Coombs试验） 类型 不完全抗体：抗体分子较短小，只能与颗粒抗原一方相结合，不出现可见的凝集现象，但能封闭抗原决定簇，使其不能再与完全抗体结合。 抗人球蛋白试验（antiglobulin test, AGT）：将人球蛋白注入异种动物，诱导动物产生抗人球蛋白血清（antiglobulin serum，AGS)，AGS加入表面结合有不完全抗体的红细胞复合物中，就能出现可见的凝集现象。 作用：检测红细胞表面结合的不完全抗体。 临床意义：新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断。 RBC为Rh+ 7S的IgG 体内发生 + 抗IgG 体外测试 抽血 一、直接抗球蛋白试验 二、间接抗球蛋白试验 检测游离在血清中的不完全抗体或红细胞表面的抗原 RBC为Rh+ 不完全抗体试剂 + 抗IgG 体外测试 间接Coombs试验各反应物加入量 反应物 受检管 阳性对照 阴性对照 血清（受检或已知） 2滴 — — 5%红细胞悬液(已知或受检) 1滴 — — 不完全抗D血清 — 2滴 — AB型血清 — — 2滴 5% Rh阳性红细胞悬液 — 1滴 1滴 二、间接抗球蛋白试验 技术要点 二、间接抗球蛋白试验 结果判断 凝集为阳性，表明受检血清有不完全抗体或红细胞上有相应抗原； 同时具备阳性对照管凝集阴性对照管不凝集，如有不完全抗体，可将血清以作倍比稀释进行效价测定。 二、间接抗球蛋白试验 注意事项 ①在37℃水浴中，抗体吸附相应红细胞上的结合程度，与致敏的时间、离子强度有关； ②离心速度和时间十分重要，原则应以最小的离心力和最短的离心时间使阳性对照管出现反应为宜。 二、间接抗球蛋白试验 方法评价 是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法，也是RhD检出的确证试验。操作繁杂，受试验条件影响较大。 二、间接抗球蛋白试验 临床意义 ◇ 血液病的检测； ◇ 鉴定血型和检查血清中不完全抗体； ◇ 有助于RhD的检出，多用于检测母体RhD抗体； ◇ 输血前交叉配血试验及其他特殊研究； ◇ 及早发现和避免新生儿溶血症的发生； ◇ 红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。 超敏反应性疾病通过体内和体外实验，可进行变应原的相关检测，包括激发试验（根据刺激物不同分为非特异性和特异性激发试验，按检测部位又分为皮肤试验、支气管激发试验、食物激发试验等）；IgE检测（总IgE和特异性IgE检测）；免疫复合物检测主要针对抗原非特异性CIC；抗球蛋白试验（直接法和间接法）；药物过敏筛选实验（组胺含量测定和特异性抗体测定 ）。 小结 第二节 IgE的检测 一、血清总IgE的检测 √ ELISA双抗体夹心法：操作简便，敏感性很高，是测定血清IgE最常用的方法。 √ CLIA：敏感度更高，特异性高，定量。 临床意义：正常人群血清IgE水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响，结果有一定差异。 参考值 0.1～0.9mg/L 某些过敏体质者高于正常1000～10000倍 血清IgE高 特应症、支气管肺曲菌病、 药物性间质性肺炎、麻风、 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等 一、血清总IgE的检测 总IgE：正常成人血清含量为 20～200IU/ml 婴儿血中IgE含量极低； 寄生虫感染时可显著增高。 sIgE: ECP(嗜酸性细胞阳离子蛋白）： 放射免疫吸附剂试验 （radioimmunosorbenttest，IRST） 酶联免疫测定法(ELISA) 化学发光 固相荧光免疫分析 一、血清总IgE的检测 临床意义 ： 1、正常人群IgE水平受环境、种族、遗传、年龄、检测方法及取样标准等因素的影响 2、IgE升高相关的常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。 一、血清总IgE的检测 √ 酶联免疫吸附试验（ELISA）：常用间接法。 √ 免疫印迹技术（IBT）：操作简单，能一次性测定多种变应原的特异性IgE，故临床已普遍采用IBT法。 二、特异性IgE的检测 （+） E E E E E E 洗涤 洗涤 洗涤 结果 ELISA间接法检测特异性IgE 特异性变应原加入待检血清 转印至NC膜 NC膜 待检血清 特异性IgE 抗-IgE·HRP 底物 特异性抗原 条带显色 NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRP IBT检测特异性IgE 目前公认的检测I型超敏反应方法之一； 具有特异性强、敏感性高； 影响因素少、对患者绝对安全等优点； 过敏性哮喘诊断； 寻找变应原。 缺点：费用昂贵、花费时间长、不同试剂盒的参比血清不同不易相互比较。 二、特异性IgE的检测 第三节 免疫