课件：结核病实验室检查的临床意义.ppt

PCR在结核病诊断中的价值 对临床标本中的结核分枝杆菌有较高的检出率； 报告时间短； 痰涂片阳性，痰PCR多次阴性，提示可能非结核分枝杆菌； 存在假阳性、假阴性问题。 石蜡包埋组织PCR敏感性高。 其他分子生物学诊断方法 可用于对结核分枝杆菌的检测、菌种鉴定、耐药株检测； 结果报告快，灵敏度、特异度高； 线性探针耐多药检测方法（HAIN） 适用范围： 1、TB的诊断 2、一线抗结核药物耐药诊断 3、二线抗结核药物耐药的诊断 4、目前，利福平（rpoB基因） 、异烟肼（Kat基因、inhA基因）耐药的诊断 所需仪器设备：生安柜、超声振荡仪、PCR扩增仪、可调温振荡仪 HAIN和目前常规药敏方法比较 比较项目 HAIN 常规药敏方法 时间 1-2天 2-3个月 生物安全级别要求 较低 二级实验室 人员培训 2-3天 2-3个月 操作简易程度 简单 复杂 仪器设备 性价比较高 -- 对环境洁净度要求 较高，易出现假阳性 较高 结核病 实验室检查 细菌学检查 免疫学检查 分子生物学检查 涂片染色镜检 分枝杆菌分离培养 分支杆菌药敏试验 分枝杆菌菌种鉴定 噬菌体生物扩增法 生物化学检查 体液免疫学诊断 细胞免疫学诊断 DNA测序 DNA探针技术 基因芯片技术 DNA指纹图谱 聚合酶链反应（PCR） 腺苷脱氨酶、乳酸脱氢酶、溶菌酶、血管紧张素转化酶 腺苷脱氨酶（ADA） 重症肺结核和血播结核，血ADA可以升高(正常 28U/L)； 胸腹水中活性结核性癌性非特异性胸腹水。以高于45U/L，灵敏度特异度较高。 结核性脑膜炎脑脊液中升高。一般结脑8U/L,隐脑、病脑 8U/L 乳酸脱氢酶（LDH） 特异性差，主要作为漏出液和渗出液的鉴别。胸腹水LDH/血清LDH0.6为渗出液，0.6为漏出液。 溶菌酶（LZM）、血管紧张素转化酶（ACE） 鉴别结核和癌性胸腹水。结核30μg/ml，癌30 μ g/ml（LZM） 结核25U，癌25U（ACE） 涂片 培养 病理 分子生物学检查 体液、细胞免疫检查 生化检查 影像检查 结 核 病 相关检查 谢 谢 大 家 * * （ 3）严重肺结核及各种危重患者。 肺结核治疗评估的主要依据之一 治愈：涂阳肺结核患者完成规定疗程，连续2次涂片结果阴性，其中1次是治疗末的涂片。 治疗失败：新涂阳患者治疗第5个月末或疗程结束时，痰涂片检查阳性，涂阴肺结核患者治疗过程中任何1次痰菌检查阳性，均为治疗失败。 缺点：不能区别是否为非结核分枝杆菌 不能区别死活菌。 结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。 检测灵敏度较低（104-105 个细菌/毫升）。 结核菌培养 传统方法：L-J固体培养基 快速培养法: 检测细菌生长过程中代谢产生的CO2或消耗的O2，显微镜直接观察、变色液体培养基等 BACTEC460系统、BACTEC MGIT960系统、Bact/ALERT 3D、ESPⅡ等。 确诊结核病 1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+1份痰标本结核分枝杆菌培养 痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现+1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性 结核菌培养临床价值 用于耐多药结核疗效判定 治愈： （1）患者完成疗程，且在疗程的后12个月，至少最后5次痰培养（每次间隔至少30天）连续阴性。 （2）如出现1次痰培养阳性，其后痰培养（间隔至少30天）最少连续3次阴性。 失败： 治疗的最后12个月，5次痰培养中有两次或两次以上阳性；或者在最后的3次，培养中有任何一次是阳性。 敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性； 特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非结核分枝杆菌； 分离出具有活力的纯培养物，为进一步药敏试验提供基础。 分离培养的优点 需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。 结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响， 操作较直接涂片法复杂，需经严格培训 。 需培养基凝固灭菌器、离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱等设备。 成本是直接涂片法的7-8倍。 分离培养的缺点 绝对浓度法：我国三十多年来一直沿用的药敏试验方法。 比例法：WHO耐药监测项目推荐药敏试验方法。 结核菌药敏试验 药物敏感性测定的重要意义 临床治疗的重要参考 流行病学的重要指标 定义耐药结核病 MDR-TB = 菌株至少对异烟肼和利福平（最重要的一线抗结核药）耐药 XDR-TB = MDR菌株加上对任意氟喹诺酮类药物、以及3种注射类二线药物中（阿米卡星、卡那霉素、卷