课件：细菌染色技术.ppt

2.染液 染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果 3.细菌因素 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性，所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现染色不均，阴阳不定的现象。 鉴别细菌： 用革兰氏染色法可将所有细菌分为阳性与阴性两类，可初步识别细菌，以利进一步鉴定。 选择药物： 可根据革兰氏染色性的不同，供临床初步选择用药方向。 与致病性相关： 大多数革兰氏阳性菌的致病物质为外毒素，而大多数革兰氏阴性菌的致病物质为内毒素。由此，可采取有针对性的治疗方案。 革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄色葡萄球菌 x 1000) 革兰氏阳性链球菌例子 革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000) 革兰氏阴性弧菌例子 革兰氏阳性产芽孢杆菌例子 革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特菌 x 1000) 革兰氏阴性弯曲菌例子 革兰氏阳性棒状杆菌例子 一、原理 结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色），也就易于鉴别。 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 标本处理 二、步骤 抗酸杆菌 非抗酸杆菌 三、结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。 每张玻片只能涂一个标本，以免染色过程中因冲洗使菌体脱落，造成阴阳性结果混淆； 注意生物安全，自我防护； 脱色时间依据涂片厚薄适当调整，以无红色为止。 ?? 抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。 一、原理 抗酸杆菌用荧光燃料Auramine O(金胺O)染色后，用含有紫外光源的荧光显微镜检查，将会发出闪亮的橘黄色。这种方法可用较低倍镜头镜检，因此能快速找出抗酸杆菌。 涂片固定 金胺O染色 盐酸酒精脱色 复染 镜检 涂布均匀，不可过厚 时间可稍微延长，但不可少于规定时间 脱色时间依片子厚薄适当调整 复染时间不可过长 荧光显微镜观察有无黄绿色荧光 标本处理 三、结果: 阳性—明亮橘黄色荧光； 阴性—无荧光 三、临床应用： 荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。 四、注意事项： 荧光染色法可以作为分枝杆菌的初筛实验，初筛阳性的须做抗酸染色确认。 特殊结构染色法 细菌的某些基本结构如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特殊结构如荚膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易着色，须用一些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法主要有荚膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等。这些染色法不仅能使特殊结构着色，还可使特殊结构染成与菌体不同的颜色，有利于观察和区别。 所谓负染色法是指使背景着色而细菌本身不着色的一种染色方法。常用的有墨汁染色法。也可用酸性染料如刚果红或水溶性苯胺黑等进行染色。因酸性染料带负电荷，而细菌本身在近乎中性的环境中也带负电荷，同种电荷相排斥，故染色时菌体不着色，而只能使背景着色。实践中常用墨汁负染色法配合单染色法（如美兰染色法）检查细菌的荚膜，使背景成黑色；菌体呈蓝色；而荚膜不着色，从而使荚膜包绕在菌体周围成为一层透明的空圈。 标本：脑脊液 处理方法：离心或用细胞离心机离心浓缩 染色方法：墨汁染色（负染色） 结果： 在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较高、染色过程要求非常严格，而普通染色法虽不能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特殊结构染色法。 鞭毛染色 每批或每天染色时应同步进行质控，质控方法如下： 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如革兰氏阳性菌的 陈旧培养物也有出现革兰氏阴性的几率，所以被检菌的菌龄一般最好在 18~24h 之内。 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影