课件：结核病实验室诊断现状(04.10.17).ppt

Xpert MTB/RIF 应该用于怀疑MDR-TB的病人、以及HIV合并结核的病人的最初诊断（强烈推荐） Xpert MTB/RIF 在MDR或HIV问题不十分严重的地区，可以考虑作为显微镜检查基础之上的后续检测，特别是用于涂阴标本的进一步检测（根据具体情况推荐，需考虑当地的资源） WHO在“201 1年全球结核病控制报告”中对该试剂的评估结论为：单次XpertMTB／RIF检测可检出99％的涂片阳性(简称涂阳)和80％的涂片阴性(简称涂阴)肺结核病患者。但有文献报道，单次XpertMTB／RIF检测涂阴培阳样本的检出率分别为72．5％和76．9％。由于涂阴患者包括涂阴培阳、涂阴和培养阴性(简称培阴)两种类型，而涂阴培阴患者的检出率必然低于涂阴培阳患者，因此，该报告中XpeftMTB／RIF的MTB涂片阴性患者阳性检出率较实际值偏高 涂阴特别是涂阴培阴患者的诊断有进一步探讨的必要，根据该检测试剂公开发表的数据，该试剂的敏感度研究均以培养或涂片阳性作为判断标准。涂阳培阳样本检出率为99．8％，培阳样本的检出率也高达90％，具有高敏感度。根据我国第5次结核病流行病学调查结果，以我国痰菌阳性(简称菌阳)患者占患者总数26．4％进行推算，该试剂的理论检出率仅为23．7％；我国结核病涂阴培阴患者占患者总数的73．6％ Xpert MTB/RIF适用于痰标本（包括去污染后的痰标本），肺外标本应用 Xpert MTB/RIF 的研究十分有限。 增加检测次数可能会增加Xpert MTB/RIF的敏感性，但是需要考虑资源情况 上述建议也适用于儿童 不能取代传统的涂片检查、培养和药敏试验（治疗监测、流行病学调查、其他一线药物以及二线药物的药敏试验） 在MDR低风险组（如新病人）Xpert MTB/RIF检测结果为利福平耐药者，建议用传统药敏试验或LPA进行确认 新检测技术验证评估与应用 完成评估 国产环介导核酸等温扩增试剂盒 新型检测检术应用情况-4 方法 商品 检测目的 流体芯片法 MDR-TB检测 荧光定量PCR溶解曲线法 检测MDR-TB/XDR-TB MODS（显微镜观察药敏实验） 无商品化试剂盒 检测分枝杆菌的药物敏感性 噬菌体生物扩增法 诊断结核感染及药物敏感性 新的固体药敏方法 硝酸盐还原试验（无商品化试剂盒） 诊断菌株对异烟肼和利福平的敏感性 薄层琼脂培养法（无商品化试剂盒） 诊断结核感染以及对异烟肼和利福平的敏感性 颜色指示方法 刃天青法（无商品化试剂盒） 检测菌株对利福平和异烟肼的敏感性 分子水平 线性探针杂交（LiPA） 基因芯片法（Genechip） 多重连接再扩增（MLPA） 变性高效液相色谱（DHPLC） 质谱（MALDI-TOF MS） 焦磷酸测序（Pyrosequencing） 实时PCR（Real-time PCR） 线性探针（V2) 多色巢式荧光定量(GenXpert) 分子诊断技术 结核菌素试验：用于流调、卡介苗接种、筛查、临床诊断与鉴别诊断，但PPD有多种分枝杆菌的蛋白成分，因而特异性差，且结果观察不便 结核抗体测定： 结核抗原测定：能早期检测，技术简便快捷，但难以获得高特异性的抗体，目前尚缺乏结核抗原检测试剂 细胞因子检测： 结核抗体测定:结核分枝杆菌感染机体，患者或有特异性IgG、 IgM、 IgA形成，联合检测可提高灵敏性 优点：简便快速，有一定的敏感性和特异性，对结核病的诊断与鉴别诊断有参考价值 缺点：假阳性较高，没有单一抗原被所有患者识别 总的来说，结核病患者的抗体反应是不完全相同的，要求设计一个由多种抗原组成的鸡尾酒式的结核病血清学诊断试验。具有灵敏度高和特异性强的结核病血清学诊断试剂要求由多种抗原的混合体构成 因此以后的研究方向是筛选各种特异性强、灵敏度高的抗原组成混合抗原，研制结核病血清学诊断试剂。有很多研究者已经进行或正在进行这方面的研究，相信在不久的将来这种研究成果可以应用于临床，服务于结核患者 特异性/灵敏度 潜伏/感染初期 活动性肺结核 脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）抗原 敏感性 63%；特异性 92.4% 作为属特异性抗原的脂阿拉伯甘露聚糖 是分枝杆菌细胞壁的重要组成，拥有较 强免疫原性与免疫调价的功能，能刺激 机体促进相应抗体产生，故可作为为结 核病血清学诊断抗原，应用较广泛。对 活动性肺结核患者的检测敏感性为63.0% 特异性达92.4%，提示LAM抗体检测不失 为一项结核病辅助诊断的有效方法 U1蛋白-早期/特异性 U1蛋白（Urine Protein 1)为Mukherjee 等收 集结核分枝杆菌H37Rv株静脉感染C57BL/6小鼠 早期（10-14天）尿液中分离得到的结核