课件：乙肝病毒感染的检测手段和诊断指标.ppt

引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒，也称丹氏颗粒。 我国的乙肝病毒感染率约60%-70%；乙肝表面抗原携带率约占总人口的7.18%。 免疫学方法 酶免疫法（ELISA） 时间分辨荧光分析技术（TRFIA） 胶体金法 分子生物学方法 HBV-DNA法（PCR） bDNA法 目的：对乙肝血清标志物进行定性的分析 优点：简单、快速、稳定 缺点：敏感度相对较低；出现钩状效应（前带/后带）和受到交叉污染的可能性较大；不能够对乙肝病毒标志物实施动态观察；对低水平HBV感染标志物的漏检率相对较高。 示踪剂：镧系元素 流程： 具有双功能基团的镧系元素对抗原或抗体进行标记 通过时间延迟将非特异性的荧光去除 发生特异性结合时，抗原抗体复合物在可以增强液中发生解离，在特定的激发光的激发作用下发出一种特定波长的荧光，在固定的时间对特异性荧光进行检测即可 意义：适用于急诊或手术前对HBV病毒进行定性检查，其主要优点在于检测速度较快、操作简单方便，对操作技术和检测环境的要求相对较低。 胶体金：由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态。 原理：胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。 类型：免疫胶体金光镜染色法 免疫胶体金电镜染色法? 胶体金免疫层析法? 等 优点：检测速度相对较快，在取得血清的情况下，一般情况下在十分钟之内就可以对结果进行判读。 缺点：只能对乙肝病毒实施定性检测，准确率与酶联免疫吸附试验比较相对低，且对于弱阳性的表现度相对较差，造成弱阳性标本的漏读和误读的可能性相对较大，性价比跟准确度方面都要略逊于ELISA。 传统PCR PCR-ELISA 实时定量PCR HVB-DNA法（PCR） 原理：探针杂交 方法：bDNA是人工合成的侧链DNA片段，每个侧链上都可以带标记物。在用于检测的微孔板上包被有一套人工合成的HBV-DNA特异性核苷酸捕获探针，当HBV-DNA从细胞中释放出来时，被板上的捕获探针所捕获。另一套靶向延伸探针既能与捕获的HBV-DNA杂交，又能与预放大探针杂交。随后，放大探针与预放大探针杂交，形成bDNA复合物。标记有多个碱性磷酸酶的探针固定到该复合物上，与发光底物共同孵育，记录发光强度，并根据标准曲线求得HBV-DNA浓度。 意义：目标物不被扩增,但检测信号被放大,从而提高了灵敏度。 bDNA法（branched DNA） 【1】胡晓丹,目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究[J].国际病毒学杂志,2015,Vol.22,supplement.142-143. 【2】王健,闵福援,乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义[J].中华检验医学杂志，2005，Vol.28, No.1.113-115. 【3】张宝华,黄婷,乙型肝炎病毒检测方法的相关性分析[J].现代检验医学杂志 ,2010, Vol.7, No.4.69-71. 【4】王家杰,何庆明,刘佳文,李宝玲,李金红,乙型肝炎病毒标志物定量检测方法的评价[J].国际检验医学杂志 ,2015, Vol.3, No.1.123-124. 【5】魏来,乙型肝炎与丙型肝炎病毒感染临床检测的进展[J]. 2015, Vol.28, No.6.657-659. ---Thanks--- 乙肝的全身症状主要表现为体力不支，疲劳，没精神，主要与肝功能受损，进食减少，食物消化吸收障碍，营养物质摄入减少造成的，另一方面呢，因为乙肝造成的肝脏炎症导致消耗增加而营养物质摄入不足导致肝脏代谢功能受损，加上乙肝患者精神和心理上的压力，影响乙肝患者的睡眠和休息导致乙肝患者看起来很没有精神。 * * 钩状效应即HOOK效应,是指由于?抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。 抗原?抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体， 均可发现只有在两者分子比例合适时才出现最强的 抗原-抗体反应。以沉淀反应为例，若向一排试管中加入一定量的抗体，然后依次向各管中加入递增量的相应?可溶性抗原，根据所形成的沉淀物及抗原抗体的比例关系可绘制出?反应曲线 * * * * * 乙肝的全身症状主要表现为体力不支，疲劳，没精神，主要与肝功能受损，进食减少，食物消化吸收障碍，营养物质摄入减少造成的，另一方面呢，因为乙肝造成的肝脏炎症导致消耗增加而营养物质摄入不足导致肝脏代谢功能受损，加上乙肝患者精神和心理上的压力，影响乙肝患者的睡眠和休息