课件：dgh呼吸系统疾病动物模型.ppt

目的　 通过建立操作简便、成功率高、使用经济的急性肺血栓栓塞大鼠动物模型,掌握自体肺血栓栓塞动物模型的制备,检测自体肺血栓栓塞的持久性。 例四、大鼠自体肺血栓栓塞模型的成功制备 一、材料 二、方法 (体外制备血栓栓子) 2 大鼠麻醉后,行气插管,连接呼吸机 本实验研究发现：大鼠自血栓注入后并没有表现持续的肺动脉压升高或氧分压降低,因为大鼠具有极高的纤溶能力,所以自体血栓不能产生一个持久固定的肺栓塞模型。 结 论 因此与临床肺血栓栓塞的病理生理过程更符的、持久固定血栓模型的研究应成为今后肺栓塞动物模型的主要研究方向。 冯伟等 大鼠自体肺血栓栓塞模型的成功制备 临床肺科杂志 2015年5月 第20卷第5期：785-788 the end 谢谢！ 混合烟雾制烟方法： 1. 配方：锯末200g，烟叶15-20g，辣椒6-7g，硫黄1g。 2. 点燃后，在20-30分钟燃化，混合烟雾含尘量 150-200mg/m3，颗粒大小0.5-1.0μm以上。 香烟烟雾制烟方法： 1. 用香烟1.5支，在21L容器中燃化，豚鼠吸气10分钟。 2. 换气5分钟。 3. 用香烟1支，再次燃化，豚鼠再吸气10分钟。 流感病菌菌液制作方法： 1. 接种流感病毒后， 37 ℃培育48小时的鸡胚液，病毒液血凝滴度为1：320。 接种流感杆菌后， 37 ℃ 培养18-24小时，收集菌液备用。在滴鼻使用前，将菌液中流感杆菌的浓度稀释为7×108个/ml 。 混合细菌菌液制作方法： 1. 流感杆菌，9 ×108个/ml 。 甲型链球菌，6×108个/ml 。 卡他性炎性菌， 9×108个/ml 。 肺炎双球菌， 6×108个/ml 。 将上述4种菌液以4：3：2：1的比例混合，备用。 1. 溶液Ⅰ：卵清蛋白1000 μg/ml 2. 溶液Ⅱ：氢氧化铝10 mg/ml 3. 将溶液Ⅰ与溶液Ⅱ以1：1的比例混合。注意混合液要新鲜配制 1号卵清蛋白抗原液配制方法： 2号卵清蛋白抗原液配制方法： 1. 溶液Ⅰ：卵清蛋白300 mg/ml 2. 溶液Ⅱ：灭活百日咳杆菌疫苗15×109个/ml 3. 溶液Ⅲ：氢氧化铝300 mg/ml 4. 将溶液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ，以1：1：1的比例混合。注意混合液要新鲜配制 TDI-BSA抗原制备： 1. 溶液A：1%TDI/1,4-二氧六环液 2. 溶液B：1%BSA/碳酸氢钠溶液 3. 将溶液B置于冰水浴中，开磁力搅拌，逐滴加入溶液A，调节该溶液的pH值至8.5。 4. 1小时后移至透析袋中过夜，使1,4-二氧六环挥发。 5. 在pH为7.4的PBS中彻底透析6次，使溶液在紫外分光光度计245nm处有高吸收峰。 6. 将制备成的上述抗原，加卡介苗、费氏完全佐剂混合，用乳钵研磨成油包水乳剂备用。 PA-BSA抗原制备： 1. 溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。 2. 溶液B：2%BSA/碳酸氢钠溶液(9%)。 3. 将溶液B置于冰水浴(4℃)中，开磁力搅拌器，搅拌1小时。 4. 将制备好的PA-BSA抗原与弗氏完全佐剂1：1混合，乳钵中研磨，形成油包水乳剂备用。 PA-HSA抗原制备： 1. 溶液A：PA丙酮溶液(30mgPA溶解于1ml丙酮中)。 2. 溶液B：2%HSA/碳酸氢钠溶液(9%)。 3. 将溶液B置于冰水浴(4℃)中，开磁力搅拌器，搅拌1小时。 4. 将制备好的PA-HSA抗原与弗氏完全佐剂1：1混合，乳钵中研磨，形成油包水乳剂备用。 胶原和肾上腺素混合液制备： 1. 胶原溶液：200 μg/ml 2. 肾上腺素溶液：100 μg/ml 3. 将以上两种溶液以1：1比例混合、摇匀。 以下是附录1-5 常用药物的最大给药量 动物 项 目 灌 胃 皮下注射 肌肉注射 腹腔注射 静脉注射 大鼠 最大给药量 2mL lmL 0.4mL 2mL 4mL ? 使用针头 16号(钝头) 6号 6号 6号 5号 小鼠 最大给药量 lmL 0.4mL 0.4mL lmL 0.8mL ? 使用针头 9号(钝头) 5 l/2号 5 1/2号 5 1/2号 4号 豚鼠 最大给药量 3mL LmL 0.5mL 4mL 5mL ? 使用针头 16号(钝头) 6 1/2号 6 1/2号 7号 5号 家兔 最大给药量 20 mL 2mL 2mL 5mL 10mL ? 使用针头 10号导尿管 6 1/2号 6 1/2号 7号 6号 人及不同实验动物之间药物量对应值 例如： 某药物在60kg体重的病人的剂量为21.0?g.kg-1 . d-1， 一只5kg的猴为53.6 ?g.kg-1 . d-1，