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第六章 化学检测 根据物质的化学性质而对物质进行定量、定性测定。 应用最早、最广泛的检测技术 简便、快速、操作容易 一 糖类的化学检测 糖类包括多糖、双糖、单糖 单糖和某些双糖具有游离羰基——还原糖 多糖和蔗糖等无还原性——非还原糖 糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原性质，与试剂（氧化剂）进行氧化还原反应而进行测定的。 非还原糖必须转化为还原糖再进行测定 最常用的试剂：斐林（Fehling）试剂 基本组成：A：CuSO4溶液 B: NaOH和酒石酸钾钠溶液 使用时A、B等体积混合(生成酒石酸钾钠铜） 酒石酸钾钠铜是氧化剂，可与还原糖的游离羰基发生氧化还原反应，而进行糖的测定。 定糖常用方法 1 兰——爱农（Lane-Eynon）法 次甲基蓝（亚甲基蓝、四甲基蓝）法、置换法、直接滴定法 反应终点用次甲基蓝指示剂显示（还原糖滴定斐林试剂，由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜全部还原后，过量1D还原糖使次甲基蓝还原，蓝色消失） 多糖或其他非还原糖需转化为还原糖后再滴定 如淀粉，可用酸解或酶解 操作要点 （1 ）斐林试剂的标定 （a）标定预备试验 A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖液（0.1％或0.2％）V1mL。 （b）标定 A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，从滴定管中预先加入（V1-1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V0 (2) 定糖 （a）定糖预备试验 A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖液（0.1％或0.2％）V2mL。 （b）定糖 A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，补加（V0-V2）mL水，并从滴定管中预先加入（V2-1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V (3) 计算 还原糖含量（以葡萄糖计） ＝（V0-V) × c × (1/10 )×n 注意： （a）AB分开储存，防止Cu++变化，临用混合 （b）单标移液管吸液准确，外壁也需擦干净 （c）体积需控制在一定范围内，对pH有影响 （d）煮沸时间要一致 （e）注意指示剂加入时间和加入量一致 （f）滴定速度一致（后滴定0.5～1mL，1min内完成） （g）产物Cu2O不稳定，次甲基蓝变色也不稳定，暴露于空气或沸腾颜色变化，滴定过程不能摇动，不可中途中止加热 斐林试剂快速法： 在斐林试剂中加入亚铁氰化钾（黄血盐）反应终点为蓝色消失，淡黄色出现。反应终点比兰－爱农法更为明显。 2 碘量法 I2→ NaIO(氧化剂），其氧化能力较弱，仅适用于醛糖的测定，与酮糖不起反应 操作要点： （1）标准硫代硫酸钠溶液配制，0.05 mol/L，沸腾后冷却水配制，存放在棕色瓶中，一周后用标准重铬酸钾标定。 （2）标准碘液配制，0.1mol/L （3）空白滴定：空白液，用硫代硫酸钠滴定试剂中全部碘 碘量瓶中，10mL0.1mol/L碘液＋15mL0.1 mol/LNaOH＋5mL空白液，摇匀后暗反应15min＋1mL1mol/L硫酸溶液，用0.05mol/L硫代硫酸钠滴定至浅黄色，加0.2mL0.5％淀粉液作指示剂，滴定至蓝色消失，记录V0 (4)样品滴定：以5mL样品液代替空白液， V1 (5) 计算： 醛糖含量＝ （V0 － V1）C× M × n 注意：暗反应后需酸化再滴定，滴定时开始轻摇（碘挥发），后再摇（淀粉吸附碘） 配合次甲基蓝法测定某些糖含量（如果糖） 3 铜试剂法 将还原糖与二价铜离子反应生成的Cu2O用碘氧化，再用硫代硫酸钠滴定反应液中剩余的碘而测定样品还原糖的含量。 （1）铜试剂的配制 主要提供二价铜离子及碘 （2）标准曲线的制作 （a)标准葡萄糖液的配制 0.1%或0.05％（根据所用铜离子试剂定） （b)三角瓶编号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液（mL ) 0 1 2 3 4 5 蒸馏水（mL ) 5 4 3 2 1 0 铜试剂（mL )