第三讲食品微生物检验指标.pptVIP

大肠菌群检验第一法：MPN计数 （2008，2010） 第二节 大肠菌群MPN 二、大肠菌群MPN的常规检验方法 二) 大肠菌群检验第二法：平板计数法 （2008，2010） 第二节 大肠菌群MPN 二) 关于培养基 LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆盐发酵培养基的作用相同，但更具优越性：LST中的抑菌剂是月桂基硫酸盐，比胆盐稳定性好，更容易观察。 BGLB肉汤用于乳糖发酵确证试验 抑制剂：煌绿，也叫做亮绿；牛胆盐，抑制革兰氏阳性菌生长。 抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，因此添加时应严格按照标准方法进行。 大肠菌群：紫红色菌落，周围有胆酸盐沉淀；沙门菌和志贺菌：无色菌落。 原理：乳糖作为可发酵碳源；胆盐和结晶紫抑制革兰阳性菌生长；中性红为酸碱指示剂 临用前配制！ 每皿倾注15-20mL，凝固后再加3-4mL覆盖（防止蔓延生长） 第二节 大肠菌群MPN 三、大肠菌群MPN的其它检验方法 1. 疏水网膜法（hydrophobic grid-membrane filter, HGMF） 加拿大的Sharp AN博士等(1974)首次报道。其基本原理是：以疏水物质在5cm2、孔径为0.45μm的滤膜上，横竖各刻印40条线，将滤膜分为1600个小格，以疏水线作为栅栏，防止菌落扩散。样品稀释液首先通过5μm的前滤器过滤，再通过0.45μm的HGMF滤膜过滤，然后根据所需检验菌的特性，将滤膜置于不同的选择培养基上培养24h~48h，阳性菌落即可通过显色而进行鉴定，如果是大肠菌群则呈蓝色。根据阳性菌落数查“阳性菌落数与单位生长最近似值换算表”即可得出单位样品中大肠菌群的MPN。 2. TTC显色法 3. DC半固体试管法 4. 纸片法 第二节 大肠菌群MPN 三、大肠菌群MPN的其它检验方法 1. 疏水网膜法 本法可在24h~30h得出结果，大肠菌群准确率为100%，无假阳性。 该法的优点在于：只使用单一的稀释度，大大减少了检验过程中的随机误差和系统误差；在过滤时除掉了所含的一些固体物质， 及一些不利于细菌生长的可溶性物质，便于细菌的生长；因为滤膜先在营养琼脂上培养4h~5h，再转移到选择性培养基，使受伤细菌得以恢复，因此缩短了检出时间，提高了灵敏度。 2. TTC显色法 3. DC半固体试管法 4. 纸片法 第二节 大肠菌群MPN 三、大肠菌群MPN的其它检验方法 1. 疏水网膜法 2. TTC显色法 该法使用的是含有TTC（氯化三苯四氮唑）的乳糖发酵培养基，接种方法与常规法相同。接种后于35℃~37℃培养18h~24h，观察TTC乳糖培养基的显色和产气现象来判断大肠菌群，然后根据阳性管数，查大肠菌群MPN检索表，报告大肠菌群数。 3. DC半固体试管法 4. 纸片法 第二节 大肠菌群MPN 三、大肠菌群MPN的其它检验方法 1. 疏水网膜法 2. TTC显色法 3. DC半固体试管法 该法是将检样稀释成3个稀释度，分别接种于含有DC（去氧胆酸钠）的半固体培养基中，充分混合，待凝固后，放入37℃温箱内培养18~24h，根据培养基的颜色和有无气泡的产生或琼脂崩裂现象来判断大肠菌群，并根据阳性管数查MPN检索表报告大肠菌群数。 4. 纸片法 第二节 大肠菌群MPN 三、大肠菌群MPN的其它检验方法 1. 疏水网膜法 2. TTC显色法 3. DC半固体试管法 4. 纸片法 该法是将含有溴甲酚紫和TTC成分的培养基浸渍纸片，然后将稀释成三个不同稀释度检样分别涂布在三张纸片上，置36±1℃温箱中培养15h，根据纸片上菌落颜色和菌落周围纸片颜色来判断大肠菌群，并根据纸片的阳性片数，查大肠菌群MPN检索表进行报告。 纸片法 目前，大肠菌群检测纸片已在全国各地疾病预防控制中心实验室广泛应用，食(饮)具大肠菌群纸片检测法已被列为中华人民共和国国标。 据报道，该方法和九管法检测结果的总符合率为94.5％。 其他方法：coliform bacteria test kit.pdf 3M测试片法 以Petrifilm为载体的测试片：美国3M公司发明的一种用于菌落计数的可再生的水合物干膜，由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格并且覆盖有培养基，上层是聚丙烯薄膜。培养基中含有微生物生长及生化试验所需的营养及试剂，并通过一种冷水可溶性的凝胶剂附着在上下两层膜上。生化试剂有特异性显色物质和抗生素。待测样品处理后不需要增菌，直接接种纸片，适宜