htr clpP基因对变异链球菌生长和耐酸性影响.docx

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的研究htrA、clpP基因缺失对变异链球菌生长及耐酸性影响。 方法利用变异链球菌标准株及前期实验成功构建的htrA单基因缺陷株、clpP单 基因缺陷株及htrA．dpP双基因缺陷株，测定4种菌株在正常培养条件下不同时 间段的吸光度，采用MTT试验测定4种菌株在不同时间段的甲躜吸光度变化情 况并探究其与平板活菌计数法所得的活菌量之间关系；将4种菌株培养至对数 中期，分成两组，一组作为实验组进行5小时预酸化处理(pH=5．5)，一组作为 对照组在普通TPY培养液中进行5小时处理，然后将两组菌株在致死性酸环境 (pH=3．O)处理3小时，每隔l小时取菌液采用平板活菌计数法测定活菌数， 计算得到生存率，统计学分析。 结果1．在正常营养条件下，标准株的生长快于htrA、htrA．clpP缺陷株(P0．05 )，除3．4小时外标准株与clpP缺陷株生长无明显差异(PO．05)，clpP缺陷株 生长快于其他两种缺陷株(Po．05)，但htrA缺陷株与htrA．clpP缺陷株生长 无明显差异(P0．05)；2．未经预酸化理4种菌株的生存率中，3小时内，标准 株、htrA单基因缺陷株和clpP单基因缺陷株的生存率并无明显差异(P0．05)， 而htrA．clpP双基因缺陷株变化明显，差异有统计学意义(P0．05)，预酸化处 理后，与标准株相比，htrA单基因缺陷株、clpP单基因缺陷株及htrA．clpP双基因 缺陷株的生存率都有下降(P0．05)；3种缺陷株相比生存率差异没有明显差 异(PO．05)，预酸化处理的标准株和htrA单基因缺陷株、htrA．clpP双基因缺 陷株生存率均明显高于未经预酸化处理(PO．05)，预酸化处理对生存率的影 响大于两种基因缺失(P0．05)。 结论1．本实验中htrA、clpP缺失均可抑制变异链球菌的生长，并且双基因缺陷 对细菌生长抑制作用与htrA单独缺失相似，MTT试验可在一定的菌数范围内反 映标准株与三种缺陷株的活菌数；2．与变异链球菌标准株相比，htrA、clpP基因 单独或同时缺失都使菌株耐酸能力有不同程度的下降。 关键词：变异链球菌htrA clpP生长酸耐受 天津医科大学硕士学位论文Abstract 天津医科大学硕士学位论文 Abstract Objective：To study the effect of htrA and clpP on the growth of streptococcus mutans in order to find out the differences between mutant strains and streptococcus mutans standard strain．To study the acid tolerance O f differences between Streptococcus mutant standard strain and the three mutant strains． Methods：The streptococcus mutans standard strain and htrA(high temperature requirement A)、clpP(caseinolytic protease P)、htrA-clpP mutant strains were cultured in TPY medium in the same time．Nephelometer method was used to measure the A value of culture medium．MTT method was used to gain the A value of formazan at different time points．and calculated the 1inear relation between those and quantity of living bacterium which was measured by flat living bacterium notation． Strains were grown to mid—logarithmic growth phase and devided into experimental group and control group．Experimental group was resuspended in TPY at pH 5．5 for 5 h as adapted strains．The control group was treated in TPY at pH 7．0