IGF-1通过JAk-STAT通路促进牙髓细增殖和分化的体外研究.docx

IGF-1通过JAk-STAT通路促进牙髓细增殖和分化的体外研究.docx

  1. 1、本文档共52页,可阅读全部内容。
  2. 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
IGF-1通过JAk-STAT通路促进牙髓细增殖和分化的体外研究

河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则,承担相应法律责任。 一,,。~ .。∥?:毫≥一:_弋. 研究生签名:王两导师签章:f诤营玎二级学院领≤釜;:j~ j.一jI‘、 {≯: 毒:, 矽/歹铮一弓月纠日1/ \曼,,/ 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:王需 导师签章: 俐9年弓月≥f日 万方数据 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文IGF.1通过JAK.STAT通路促进牙髓细胞增殖和分化的体外 研究 前言刖舌 ..1U“··l 材料与方法 .10 结果 .20 附图 ..23 附表 .31 讨论 .32 结论 ..36 参考文献 .37 综述胰岛素样生长因子.1对人体多能干细胞生物活性的影响及机制 的研究进展 .40 致谢 .49 个人简历 .50 万方数据 中文摘要 I GF一1通过JAK-STAT通路促进牙髓细胞增殖和分化的 体外研究 摘 要 目的:通过观察JAK.STAT通路抑制剂AG490对IGF.1调控人牙髓 细胞(human dental pulp cells,HDPCs)增殖、矿化能力及矿化相关基因的 影响,探讨JAK.STAT通路在IGF.1促牙髓细胞增殖和分化中的作用。 方法:牙髓细胞分离培养及来源鉴定:选取因阻生或者正畸减数拔除 的健康恒牙,采用组织块酶消化法分离、提取牙髓细胞并进行原代培养, 当细胞增殖并汇合达孔底80%时,用0.25%胰蛋白酶消化并传代,牙髓细 胞传至34代时,选用免疫组化法检测波形蛋白和角蛋白表达以鉴定细胞 来源。 IGF.1对人牙髓细胞增殖的影响:以3×103个/孔牙髓细胞接种于96 孔培养板中,细胞培养24h后,换无血清DMEM饥饿细胞24h,然后分 别用含2%血清浓度的5、10、25、50和100ng/ml IGF—l刺激液继续培养, 培养1d、3d、5d和7d,每3天换一次液,每;fL力H 20皿vrrr溶液,4h后 吸净培养液,每;/L,ln 1 501alDMSO溶液,酶标仪以490nm波长检测各孔吸 光度(OD)值。 IGF.1诱导牙髓细胞增殖过程中JAK.STAT通路的作用:以同样实验 条件将牙髓细胞接种于96孔板中,分5组:①对照组②空白对照组③ l OOng/ml IGF.1组@50I_tmol/L AG490+1 00ng/ml IGF.1组@50pmol/L AG490组,培养1d、3d、5d和7d采用MTT法检测细胞增殖。 碱性磷酸酶染色和茜素红染色分析IGF.1对人牙髓细胞的矿化作用: 以2×105个/-TL牙髓细胞接种于6孔板中,待牙髓细胞融合至80%时,换 成以下4组矿化诱导液①矿化诱导液(Control/M)②100ng/ml IGF.1的矿 化诱导液③100ng/ml IGF一1+50pmol/L AG490的矿化诱导液廷)509mol/L AG490的矿化诱导液,分别刺激牙髓细胞7d、14d和21d,在室温下用 4%的多聚甲醛固定30rain,分别进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色分析。 茜素红染色后每孔加入lmll0%氯化十六烷基吡啶,测定562nm波长下 0D值。 万方数据 中文摘要 RT-PCR检测成牙/成骨基因mRNA的表达:在上述4组矿化诱导14d 的牙髓细胞中加入lmlTRIzol,参考TRIzol说明书提取总RNA。根据 M-MLV第一链合成系统操作说明书反转录获得单链cDNA,使用RT-PCR 检测ALP、OCN、OPN和DSPP的mRNA表达。 Western blot及免疫荧光法检测JAK.STAT通路JAK2蛋白磷酸化水 平:用含蛋白磷酸酶抑制剂的细胞裂解液RIPA将上述4组矿化诱导4h 后的牙髓细胞裂解,提取总蛋白,采用SDS.PAGE凝胶电泳,随后转至 PVDF膜,牛奶蛋白封闭后,分别孵育P.JAK2(1:1000)与GAPDH(1: 1000)一抗及抗兔IgG二抗(1:20000),最后用双色红外激光扫描仪进行 扫膜,Image J软件分析结果。将处于对数生长期的牙髓细胞消化,以t04 个/ml浓度的细胞悬液接种于六孔板中,培养24h后

文档评论(0)

186****0507 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档