IL10受体基因多态性及其信号转导通路与人SL发病关系的分析.docx

·中文论著摘要· 儿．10受体基因多态性及其信号转导通路与人SLE发 病关系的研究 研究背景及目的 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一个可累及全身多个系 统的慢性炎症性自身免疫性疾病。SLE临床表现各异，可累及皮肤、粘膜、关节、 肾脏、肺、心脏、血液系统等多个系统。SLE病因不清，可能与遗传、性激素、 感染及环境、机体免疫异常等多种因素有关。目前一般认为SLE的发病是激素和 环境因素触发了具有遗传易感性的个体发生了免疫异常，最终导致各个脏器损伤。 白细胞介素10(Interlukin-10，IL．10)是Th2类细胞因子，抑制Thl细胞产生几．2、 脚、TNF-ct等细胞因子，抑制单核细胞活化及分泌细胞因子，具有免疫抑制作 用；然而儿．10还可以促进人B细胞增殖并分化为分泌抗体的细胞，促进CD8+T 细胞活化，又具有免疫刺激作用。近年的研究证实IL．10参与调节性T细胞的分 化和功能。Llorente等最早描述了SLE患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)IL．10mRNA表达增高，而健康对照表达较少。后续的 多个研究证实了IL．10mRNA和蛋白在SLE患者PBMCs中表达增高，而且几乎所 有测定血清IL．10水平的研究均支持IL．10与SLE疾病活动性相关。但是其作用 机制还不明确，多数研究证明IL．10促进SLE发生发展，也有的试验表明IL．10 在SLE发病中具有保护作用。所以我们假设IL．10受体在SLE中可能有异常，导 致儿．10作用的不一致性。 IL．10必须与其特异性受体结合才能发挥作用。功能性的IL．10受体包括四个 亚单位，两个与配体特异性结合的a链(Interlukin-10 receptora,IL．10R1)和两个辅 助信号转导的p链(Interlukin-10 receptorlB，IL-10R2)。IL-10与IL一10R1结合后，经 JAK-STAT信号转导系统向细胞内传递兴奋性或抑制性信号。对小鼠IL．10R1基因 编码区序列进行的DNA序列分析显示，狼疮模型小鼠NZW和MRL／Ipr小鼠的  IL-10RI基因共同存在多处变异，而非狼疮鼠则无相关变异，提示IL．10R1可能是 一个狼疮易感基因。最近有研究表明，在欧洲自人中ILl0R1有意义多态性位点 G330R在SLE患者和类风湿关节炎患者中分布增高，提示其可能与SLE易感性有 关。 关于IL-10R在SLE中表达情况及功能方面的研究较???，2003年Cairns AP 等检测了SLE、类风湿关节炎患者及正常对照者外周血白细胞表面IL．10R1表达 情况，结果未发现3组之间IL．10R表达有差异。Valencia-Pacheco G等用流式细 胞术检测了19例SLE患者和15例健康对照PBMCs的IL．10R表达情况，结果发 现SLE患者和健康对照IL．10R表达水平相似，IL．10诱导的Jak-1、Tyk．2、Stat-1、 Stat．3磷酸化水平也没有明显差别，但是IL．10R诱导的基因表达有显著差异，主 要是凋亡相关基因和细胞因子及其受体基因。 为了研究IL．10R1外显子基因多态性与中国汉族SLE患者发病的相关性，我 们首先对50例中国北方汉族人群IL．10R1外显子进行了基因测序，得到了中国汉 族入IL-10R1外显子基因多态性的分布情况，进而筛选出分布频率大于O．1的能导 致编码氨基酸改变的有义SNP位点进行了疾病相关性分析。为进一步明确IL．10R 在SLE发病过程中的作用，我们还应用流式细胞术方法检测了SLE患者及正常对 照者外周血细胞的IL．10R1表达情况和IL．10R信号转导通路有无异常。 试验方法 一、 病例 在基因相关性分析中，对309例SLE患者和303例正常对照者进行了IL．10R1 外显子基因多态性检测。对28例SLE患者和14例正常对照进行了外周血细胞 IL．10R1表达检测，其中14例狼疮肾炎患者，14例非狼疮肾炎。共对13例SLE 患者和7例正常对照者进行了IL．10R通路的检测。 SLE的诊断符合1982年美国风湿病协会(ACR)制定的SLE分类标准，分 类标准ll项中，如有4项或4项以上诊断为SLE。正常对照者与SLE患者性别、 年龄相匹配。以SLE疾病活动性指数(SLE disease activity index，SLEDAI)判定 SLE疾病活动性，计分超过或等于9分为病情活动(Active)，否则为非活动性 (Inactive)。 2  二、DNA测序 采用酚氯仿法提取基因组DNA。根据IL．10R1的7个外显子分别设计引物， 扩增序列包含各外显子上下游至少50个碱