ILT4和HLAG在NSCLC中的共表达对病人预后的影响及其机研究.docx

山东大学硕士学位论文 CATALOGUE Chinese abstract ． ．． l English abstract ．5 Code description ．8 Thesis 1’ext Preface ． ．。 ． ．．9 Materials and Methods ．．1：! Resuits ．3() Discussion ． ．．． ．． ． 3：21 Summary ．． 36 Tables and charts ．37 Reference ．．zI：! Acknowledge ．45 Papers published ． ． ．．．47 English papers ． ． ．48 万方数据  山东大学硕士学位论文 I LT4和HLA—G在NSCLC中的共表达对病人预后的影响 及其机制研究 研究生 张晏文 专业 肿瘤学 导师 孙玉萍 中文摘要 【研究背景】 肺癌是世界范围内发病路和死亡率均很高的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生 命健康。非小细胞肺癌(NSCLC，non．small．cell lung cancer)是肺癌最常见的类 型???占肺癌所有类型的的85％。ILT4是免疫球蛋白样转录因子家族的一员，主 要通过免疫受体络氨酸抑制基序产生抑制信号。本课组前期研究在NSCLC细胞 中检测到ILT4的表达，且其表达与患者临床预后具有相关性，ILT4可以通过免 疫调节和非免疫调节参与促进NSCLC进展的过程。HLA．G属于非经典MHCl 分子，可在肿瘤组织中表达并发挥免疫逃避的作用。已有研究证实，HLA．G在 NSCLC患者肺癌组织和血浆中均有表达，并与患者临床病理参数和预后相关。 综上所述，ILT4和HLA．G均可表达于NSCLC中，而且均可以影响NSCLC的 进程。由此我们推测，ILT4和HLA．G可能通过相互作用参与NSCLC的进展。 据我们所知，关于ILT4和HLA—G在NSCLC中的共表达作用和相互调节机制目 前尚无人研究。本课题组拟研究ILT4和HLA—G在NSCLC组织和细胞中的共表 达，分析二者共表达与NSCLC患者预后的关系，并进一步研究二者参与NSCLC 进展的分子生物学机制，这将对提高NSCLC治疗的有效率、延长病人的无病生 存期、改善预后具有重要意义。 【目的】 明确ILT4及HLA．G在NSCLC细胞系和肿瘤组织中的共表达情况；明确ILT4 与HLA—G的共表达对NSCLC患者预后的影响；明确ILT4与HLA．G在NSCLC 中共表达的相互调节作用；探究二者相互作用影响NSCLC发生发展的可能机制； 【方法】 万方数据  山东大学硕士学位论文 1、采用免疫组化方法，检测81例NSCLC肿瘤组织中ILT4和HLA．G的表 达情况，分析ILT4与HLA．G表达之间的相关性，从而分析ILT4一HLA．G共表达 与患者临床病理参数的关系； 2、收集81例患者病历资料，采用SPSS 18．0统计学分析软件中Kaplan．Meier 法分析并绘制生存曲线，观察ILT4与HLA．G的共表达对NSCLC患者生存和预 后的影响。 3、采用RT-PCR和Western Blot的方法，检测5株NSCLC细胞系A549、 H1650、H226、H1299、H1975中ILT4及HLA．G mRNA和蛋白水平的表达情况。 4、检测上调或下调受体ILT4的表达是否对HLA．G的表达产生影响。采用 瞬时转染技术，分别用Pez．1v105．IU、．4(ILl’-4 vector)质粒瞬时转染ILT4低表 达细胞株(H1650)上调ILT4的表达，用pGPU6／GFP／Neo．shlLT4(shlLT4)质 粒瞬时转染ILT4高表达细胞株(A549)下调ILT4的表达，通过RT-PCR和Western Blot的方法，检测相应细胞株中HLA．G mRNA和蛋白水平的表达变化； 5、在HLA．G低表达细胞株(1650)中加入不同浓度的HLA．G重组蛋白刺 激，采用RT-PCR和Western Blot的方法检测相应细胞株中ILT4 mRNA和蛋白 水平的表达变化；采用western blot的方法检测信号通路蛋白pAKT，pERKl／2， pNF-K B。 6、在H1650细胞株中加入ILT4封闭性抗体，再加入HLA．G重组蛋白刺激， 采用western blot的方法检测信号通路蛋白pERKl／2的表达变化。 【结果】 1、在NSCLC肿瘤组织中， ILT4和HLA．G存在共表达并与临床参数具有 相关性。在81例病例组织中，ILT4和HLA．G的表达有非常明显的相关关系(P (0．0001．R=0．596)。ILT4+／HLA．G+组与其他组(ILT4．／HLA．G．组、ILT