FIT1基因表达调控机理的研究及重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析-动物遗传育种繁殖专业毕业论文.docx

Ⅳ丌基因表达调控机理的研究及重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析目 Ⅳ丌基因表达调控机理的研究及重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析 目 录 摘要 i ABSTRACT 一iii 常用中英文缩略词表 vi 第一部分猪用丌基因表达模式与调控机理的研究 ．1 第一章文献综述 1 l前言 ．．1 2 FIT基因家族的研究进展 l 2．1 FIT基因家族的表达模式 ．1 2．2 FIT基因家族的生物学功能 2 3肌肉组织特异性顺式调控元件及其在育种中的应用 ．．3 3．1核心启动子 3 3．2上游调控元件 4 3．2．】E．box元件 ．．5 3．2．2 MEF2元件 ．5 3．2．3 SRE元件 6 3．2．4 TEFI元件 ．6 3．3在动物育种中的应用 7 4目的与意义 ．．8 第二章材料和方法 10 1实验材料 10 1．1实验样品 ．10 1．2胞系 ．10 1．3载体 ．10 1．4主要仪器和设备 ．12 1．5主要试剂与试剂盒 ．13 1．6常刚试剂及配制 ．14 1．7主要的生物学软件和网站 ．15 万方数据 华中农业大学2015届博士研究生学位(毕业)论文2实验方法 华中农业大学2015届博士研究生学位(毕业)论文 2实验方法 ．15 2．1猪Ⅳ丌基冈在不同组织以及不同发育时期肌肉组织表达模式分析 15 2．1．1不同组织以及不同发育时期肌肉组织总RNA的提取 ．15 2．1．2 cDNA的合成 17 2．1．3定量分析猪用刀基因在不同组织以及不同发育时期肌肉组织中的表达水 平 一17 2．2用丌基因在不同分化时期C2C12细胞表达模式分析 18 2．2．1 C2C12细胞的培养与分化 18 2．2．2不同分化时期C2C12细胞总RNA提取与cDNA合成 19 2．2．3定量分析仃丌基因在不同分化时期C2C12细胞中的表达水平 20 23猪Ⅳ丌基因。}游调控区域序列的克隆和测序 21 2．3．1猪基因组DNA的提取 21 2．3．2猪Ⅳ丌基因5’端上游调控区域序列的克隆 ．22 2．3．3 PCR扩增产物的纯化回收 23 2．3．4 pMDl8一T载体的连接与转化 一23 2．3．5阳性克隆的检测和测序 24 2-3．6 pMDl8一T载体质粒的提取与保存 ．．24 2．4猪用r，基凶上游调控区域的生物信息学分析 25 2．5猪用基因上游调控区域的缺失分析 25 2．5．1猪州丁，基因启动予不同长度缺失片段的获取 ．25 2．5．2猪仃丌基因启动予缺失片段pGL3荧光载体的构建 ．．26 2．5．3启动子片段双荧光素酶活性检测 27 2．5．4猪用丌基因启动子区E—box元件缺失分析 ．．28 2．6猪w71，基因启动子区E．box元件定点突变实验 28 2．7转录因子MyoDl的超表达实验 30 2．8转录|11子MyoDl的RNA干扰实验 ．30 2．9 ChIP实验 ．．31 第三章结果与分析 ．35 l用丌基因表达模式分析 35 万方数据 Ⅳ丌基因表达调控机理的研究及重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析1．1用”基因在猪各组织的表达谱分析 Ⅳ丌基因表达调控机理的研究及重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析 1．1用”基因在猪各组织的表达谱分析 35 1．2用基因在猪肌肉组织不同发育时期的表达模式分析 36 1_3用丌基因在不同分化阶段C2C12细胞中的表达模式分析 37 2猪用基因5’上游调控区域序列的克隆与生物信息学分析 一37 2．1猪几基因上游调控区域的克隆 37 2．2猪用丁J基因上游调控区域的生物信息学分析 38 3猪仃基因5’上游调控区域活性分析 ．．40 3．1猪几丌基因启动子缺失片段的构建与活性分析 40 3．2猪Ⅳ盯基因核心启动子区E．box元件缺失载体的构建与活性分析 42 4猪Ⅳ基因核心启动子区E—box定点突变验证分析 44 5转录因子MyoDl对F，rJ基因的调控作用 45 5．1超表达MyoDl对Ⅳ丌基因转录活性的分析 ．45 5．2 siRNA干扰MyoDl对Ⅳ丌基因转录活性的分析 ．46 6 ChIP实验验证转录因子与E—box位点的结合情况 46 第四章讨论 ．．49 1用丌基因的表达模式分析 49 2 H丌基因的转录调控机制 50 第五章小结 54 1本研究得到的结论 54 2下一步工作 54 第二部分重复序列与肌肉疾病FSHD的关联分析 55 第一章文献综述 ．55 l前言 一55 2 FSHD研究进展 ．55 2．1 FSHD症状 ．55 2．2 FSHD致病机制 ．．55 2．2．1遗传学缺陷 一55 2．2．2表观遗传学疾病 ．．57 2．2．3核定位研究 ．．59 万方数据 华中农业大学201S届博一卜研究生学位(毕业)论文2．3 华中农业大学201