IPO8作为胃癌肿瘤标志物的研究.docx

本人郑重声明： 本人郑重声明： 独立进行研究工作所 论文不包含任何其他 文的研究做出重要贡 本人完全意识到本声 学位论文作者签名．，卉乙 日期：潮年于月／0日 上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学 上海交通大学医学院博士学位论文 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 ／ 必威体育官网网址西在三年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不必威体育官网网址口。 (请在以上方框内打“√”) f 学位论文储躲唧衫 舯狮躲 倦嘲 日期知含年尹月f口日 日期：p海妇妒E1日期：p净妨妒 上海交通大学医学院博士学位论文I 上海交通大学医学院博士学位论文 I P0-38作为胃癌肿瘤标志物的研究 中文摘要 背景与目的：胃癌是我国最常见的恶性肿瘤，同时也是世界上死亡率居第二 位的恶性肿瘤。胃癌早期无典型症状，临床明确诊断时大多已为进展期，难以获 得满意的疗效。虽然通过综合治疗其预后已有所改善，而欲进一步降低胃癌的死 亡率，需要依靠早期及时确诊。胃癌的诊断通常依靠胃镜以及病理活检作为诊断 金指标，然而在对高危人群进行胃癌筛查时，由于这种方法对身体造成一些不适 和创伤，不易被广泛接受。然而通过血液进行肿瘤标志物的筛查更为方便。 目前，临床广泛使用的肿瘤标志物如CEA、CAl9．9和CA72。4用于胃癌诊 断的敏感性很低，因此，通常他们不用于胃癌病人的诊断，多作为治疗有效性和 预后的检测。为了进一步提高胃癌病人的生存率，迫切的需要发现新的具有临床 应用价值的胃癌标志物，用于胃癌的辅助诊断和高危人群的筛查。 随着蛋白质组学技术的发展，为寻找新的肿瘤标志物提供技术支持。本课题 首先使用抗体芯片(Antibody microarray)技术分析胃癌病人的血清蛋白表达谱， 选择IPO．38抗原做进一步临床验证；并研究IPO．38抗原在胃癌细胞中的表达。 IPO一38抗原作为1990年在乌克兰最早被发现的增殖标志物，相关的研究很少， 最后通过质谱技术对该抗原所属的蛋白质进行初步探索。 材料与方法：选择未手术肿瘤病人11例，包括进展期胃癌、结肠癌、胰腺 癌、肝癌和乳腺癌。采用Lab．Vision公司的高通量抗体芯片进行血清蛋白表达谱 筛查，得到的相关蛋白在不同样本中的相对丰度。所得数据经过标准化 (Normalization)和系统聚类分析(Hierarchical clustering)，绘制出差异表达的血清 样本蛋白表达图谱，挑选上调或下调2倍的血清蛋白，作为候选肿瘤标志物，进 行下一步临床验证。 首先进行血清学标志物评估，另外选择94例胃癌病人和41例正常对照人群， 上海交通大学医学皖髓士学位论文通过ELISA检测血清IPO．38的含量，进行临床验证；同时就其诊断准确性与常 上海交通大学医学皖髓士学位论文 通过ELISA检测血清IPO．38的含量，进行临床验证；同时就其诊断准确性与常 用的肿瘤标志物CEA、CAl9．9和CA72．4进行对比分析。进一步考察IPO．38血 液浓度与胃癌病人临床病理特征之间的关系；再通过入组胃癌病人随访，使用生 存函数曲线分析，判断IPO．38能否预测胃癌病人预后。然后对IPO．38作为组织 学标志物进行研究，选择了50例术后胃癌组织和相应非肿瘤胃组织标本通过组 织芯片技术(Tissue microarray)和免疫组化(Immunohistochemistry)分析IPO．38 在胃癌细胞和非肿瘤细胞中的表达。又进一步选择了55例胃癌术后病人，进行 了5年随访和临床病理特征分析。 最后通过免疫沉淀(Immunoprecipitation)纯化IPO一38抗原，经 MALDI．TOF／TOF．质谱分析，数据库有哪些信誉好的足球投注网站，发现IPO．38抗原所属的蛋白质。接 着利用免疫印记(Western．blot)、免疫组化以及激光共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope)下的共定位分析(Co．10calization)验证。 结果：通过抗体芯片对照肿瘤病人和正常人群血清蛋白表达谱的差异，发现 在胃癌病人血清中45个抗原表达上调，6个抗原表达下调。通过文献检索和参 考，选择了IPO．38单克隆抗原作为候选肿瘤标志物，进一步临床验证。 通过ELISA检测胃癌病人IPO．38血清浓度明显高于正常人群，受试者工作特 征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve，ROC曲线)评价，IPO一38