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JAKSTAT信号通路在DON和T2毒素对RAW2647细胞毒性作用中的机研究
学位论文
是否必威体育官网网址 免 如需必威体育官网网址,解密时间 年 月 日
独创性声明
本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意。
研究蚴:柙簟. 帆训年.7月以日
学位论文使用授权书
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㈣黼馘婀气 锄张勘僻
签名日期:伽11年]月诂日 签名日期:乒b 11年7月多珈
注:请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间
2.1 细胞株 l 5
2.2药品和试剂 15
2.3主要仪器和设备 17
2.4溶液配制 l 8
2.5细胞的复苏、传代和冻存 20
2.6 MTT法检测DON和T-2毒素对RAW264.7细胞的活力影响 2l
2.7实时荧光定量PCR检测通路相关基因mRNA的表达 21
2.7.1细胞处理及分组 。21
2.7.2总RNA的提取 22
2.7.3 总RNA纯度及完整性的检测 23
2.7.4逆转录反应 .23
2.7.5 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平 ..23
2.8 Western blot方法测定STATI和STAT3的磷酸化水平 26
2.8.1细胞处理及分组 。26
2.8.2细胞蛋白提取 ..26
2.8.3 蛋白浓度测定 27
2.8.4 SDS.PAGE电泳 ..27
2.8.5 Westerm印迹杂交 28
2.9 Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞凋亡 ..30
届硕士研究生学位论文
..3 l
..3 1
..3:1
3.结果与分析 33
3.1 DON和T-2毒素致RAW264.7细胞剂量及时间依赖性毒性作用 ..33
3.2细胞RNA质量的鉴定 .34
3.3 DON和T-2毒素对RAW264.7细胞炎性细胞因子mRNA水平的影响 34
3.4 DON和T-2毒素对负反馈调节蛋白SOCS mRNA水平的影响 .35
3.5 DON和T-2毒素对J舢√S仉盯信号通路关键分子mRNA水平的影响 .36
3.6在通路抑制剂的干预下DON和T-2毒素对JAK/STAT信号通路中关键分子 mRNA水平的影响 38
3.7 DON和T-2毒素对转录因子STATl和STAT3蛋白表达的研究 40
3.8 JAK/STAT通路对DON和1-2毒素诱导炎性细胞因子表达的研究 。42
3.9 DON和T-2毒素诱导STATl和STAT3基因表达时效关系的研究 43
3.1 0 MAPK与JAK/STAT通路交互作用的研究 .46
3.11 DON和T-2毒素对细胞凋亡的影响 47
3.12 DON和T-2毒素对细胞膜电位的影响 49
3.13 JAK/STAT通路对DON和T-2毒素诱导细胞凋亡的机理研究 50
3.14 DoN和T-2毒素对细胞周期的影响 .52
3.15 DON和T-2毒素对细胞周期相关基因p21和CyclinDl表达的影响 ..55
4. 讨论 .56
4.1 在单端孢毒素诱导下的炎性细胞因子调控方式 56
4.2 JAK/STAT信号通路激活的毒理学意义及其与MAPK潜在的交互作用 59
4.3 JAK/STAT信号通路对细胞凋亡的影响 6l
4.4 JAK/STAT信号通路对细胞周期阻滞效应的影响 .63
4.5 SOCS对单端孢类毒素潜在的毒理学意义 .65
5.全文总结 .69
文献综述 。70
参考文献 .84
n
JAK/STAT信号通路在DON和T-2毒素对RAW264.7细胞毒性作用中的机制研究
jgC谢 102
附录 103
llI
JA刚S仉虹信号通路在DON和T-2毒素对RAW264.7细胞毒性
作用中的机制研究 专业: 兽医药理学与毒理学
2011届硕士研究生:柳芹 指导老师:袁宗辉教授
(国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室,
华中农业大学中国武汉430070)
摘 要
单端孢霉烯毒素是由镰刀菌产生的真菌次级代谢产物,为世界范围内许多国家 地
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