Frat1在非小细胞肺癌中的达及其与βcatenin TCF4相关性的分析.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 ·中文论著摘要 ·中文论著摘要· Frat l在非小细胞肺癌中的表达及其与p—catenin、 TCF一4相关性的研究 刖 吾 研究证明：Frat(frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas)是Wnt 信号传导途径的正向调节因子【l】，通过与糖原合成酶激酶3(GSK3)结合，抑制 GSK3依赖的磷酸化作用，从而使B．catenin水平升高【2l，B．catenin通过与TCF4 结合而激活靶基因。目前，已有研究报道FRATl在一些恶性肿瘤中有过表达口5’71， 但是其过表达是否与肿瘤的临床病理因素有关尚不清楚，在肿瘤组织中Fratl过表 达与13．eatenin表达的关系是否与细胞系当中所获得的结果一致也未见报道。因此 我们选择了137例肺癌手术患者的标本(其中78例有随访资料，59例有淋巴结 转移灶标本)对Fratl的表达与B．catenin、TCF4表达的关系进行探讨，以明确在 肺癌组织中的表达情况和与临床病理因素之间可能的关系。 材料与方法 1、材料 137例原发性肺癌患者的术后组织标本收集自中国医科大学附属第一医院病 理科1998．2005年存档蜡块。男性89例，女性48例，男女性别比1．8：1。年龄33～76 岁(中位年龄58岁)。按UICC(2002)肿瘤TNM分期标准：I期34例，lI期 37例， III期61例， lv期5例。按WHO(2004)肺癌分类标准，鳞状细胞癌 63例，腺癌74例。高分化30例，中分化74例，低分化33例。对其中59例肺 癌患者的原发灶及淋巴结转移灶组织标本对比分析。对其中78例进行了术后随 访，随访日期计算从手术R起，到因复发／转移而死亡或随访截止日期为止，截止 日期为2007年8月25日。所有病例术前均未接受放、化疗。 2、免疫组织化学染色 2、免疫组织化学染色 组织经中性福尔马林固定、石蜡包埋，制成4um连续切片。切片经二甲苯脱 蜡、梯度酒精水化后行LSAB法免疫组化染色。～抗为羊抗鼠Fratl多克隆抗体 (Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA，USA l：50)、鼠抗人B．catenin单克 隆抗体(即用型，购自福州迈新生物技术公司)和鼠抗人TCF4多克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz，CA，USA l：100)。生物素标记的二抗(MB一9207， Maixin Biotechnology,Fuzhou，China)为即用型。3，3’．二氨基联苯胺(DAB)进行 显色。以磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Saline，PBS)代替一抗作为阴性对照。 SP超敏免疫组织化学试剂盒和DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术公 司。 3、结果判定 选肿瘤细胞阳性染色集中区域，每张切片计数400个癌细胞，由两名病理医 师双盲观测。Fratl评分标准：在正常的肺泡上皮及支气管上皮为阴性表达，阳性 细胞≤10％为阴性表达；／11％为阳性表达。13-catenin评分标准参考xu等标准【4】= 正常上皮组织中阳性表达并定位于细胞膜，阳性细胞数90％。阳性瘤细胞数≤ 90％为表达降低，10％以上瘤细胞核／浆表达为异位表达，异位表达和表达降低统 归为异常表达。TCF4判定标准与Fratl评分标准相同。 4、细胞培养 人类肺癌细胞系A549、LTE、661、460、BEI培养于含10％灭活胎牛血清、 2．39／LNaHC03、100units／ml青链霉素的RPMll640(Invitrogen，美国)培养液中， 贴壁生长，每2天用0．25％胰酶(Invitrogen)消化传代。 5、Transwell 用无血清的RPMll640培养液将细胞浓度调整至5x106个／ml，取lOOpk细胞 悬液滴入上室内(5x105个细胞)，下室加入含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养液， 上下室之间用孔径为81Jm的聚碳酸酯微孔滤膜(Corning，美国)分开，将小室置 37。C，5％C02条件下分别放置6，12，18h后，弃去上室内液体，擦尽膜上Matrigel 胶，100％甲醇固定30分钟，常规苏木素染色，光镜下计数细胞数。 2 6、统计学分析 6、统计学分析 应用SPSS for Windows 14．0统计分析软件进行数据处理。免疫组化结果采用 Z2检验，Spearman等级相关分析，Kaplan-Meier法，Log-Rank检验。细胞系实 验结果采用t检验，PO．05具有统计学意义。 硅 里 二I=i 7代 l、Fratl在肺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系 Fratl在正常的肺泡上皮及支气管