Lewis y抗原通调控TopoI TopoⅡ表达水增强人卵巢癌RMG1细胞粘附耐药.docx

·中文论著摘要·Lewis ·中文论著摘要· Lewis y抗原通过调控Topo—I、Topo—II 13表达水平增强 人卵巢癌RMG-1细胞粘附耐药 刖吾 卵巢癌是目前死亡率最高的女性生殖器肿瘤，其原因与卵巢癌对化疗药物的 耐药性直接相关。近年来细胞粘附介导的耐药(cell adhesion mediated drug resistance，CAM．DR)受到广泛的关注。整合素作为粘附分子介导细胞粘附影响细 胞凋亡产生CAM—DR已得到公认。细胞表面粘附分子可被糖基化修饰，而糖基化 修饰会影响CAM—DR。糖基的改变主要是由催化糖基生成的糖基转移酶的活性及 其底物的量来决定的。 Lewis Y抗原是一种卵巢癌相关抗原，该结构中岩藻糖基由0【l，2．岩藻糖转移 酶催化形成。我们在前期工作中利用基因转染技术将人的al，2．FT(H)基因转入卵 巢癌细胞系RMG．1，建立Lewis y抗原高表达细胞系RMG．1．hFUT，结果表明基 因转染后细胞系恶性生物学行为增加，对5．氟脲嘧啶(5．fluorouracil，5．FU)、卡铂、 紫杉醇等的耐药性增强。我们的结果还证明基因转染导致整合素0【5pl和整合素 耐p3表达增加，Lewis Y参与整合素0【5pl和整合素0cvp3(投稿中)的构成；并且 细胞与纤维粘连蛋白(FN)、玻璃粘连蛋白(VN)粘附后，细胞粘附、转移能力 明显增强，这些生物学行为的改变与Lewis Y抗原相关(结果待发表)。我们推论 Lewis Y抗原在整合素Q5pl及舛膨介导细胞粘附耐药中起着重要的作用。 我们在前期研究的基础上，以转染a1，2．岩藻糖转移酶基因前后的卵巢癌细胞 株RMG．1和RMG．1-hFUT为研究对象，以整合素帆B3．VN介导的细胞粘附为体 外实验模型，探讨Lewis Y抗原在卵巢癌细胞粘附耐药中的作用和相关机制。本论 文共分两部分。第一部分研究Lewis Y抗原在玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附耐药中 的作用；第二部分探讨Lewis Y抗原对卵巢癌细胞粘附耐药相关的信号分子的影 响。 方法 方法 第一部分 采用基因转染技术将人的Ⅱ1，2．岩藻糖转移酶(al，2．fucosyltransferase，al，2．FT) 基因转入卵巢癌细胞系RMG．1，建立Lewis Y抗原高表达细胞系RMG．1．11FUT， 构建玻璃粘连蛋白介导的细胞粘附模型，将细胞暴露于不同剂量卡铂，MTT法检 测细胞的生长抑制率，Hoechst33258荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况， 再利用抗Lewis Y抗体，整合素吖抗体和整合素p3抗体进行阻断，流式细胞仪 检测细胞相对凋亡坏死率的变化。 第二部分 在整合素ave3-VN介导的细胞粘附模型上，采用免疫细胞化学、western blot 检测FUTl基因转染前后细胞耐药相关蛋白，Bcl一2蛋白和Topo．I、Topo．11 0【、Topo．II 13蛋白的表达。利用抗Lewis Y抗体，抗整合素鲫抗体和抗整合素p3抗体进行 阻断，再用免疫细胞化学、Western blot检测耐药相关蛋白表达的变化。 钴里：口木 第一部分 l、RMG．1组、VN．RMG．1组、RMG．1一llFUT组和VN．RMG．1-hFUT组细胞的生 长抑制率(瓜)随着卡铂浓度的增加而升高； 2、VN．RMG-1．hFUT组的IR值明显低于RMG．1一hFUT组： 3、VN．RMG．1组与RMG．1组生长抑制率无显著差异； 4、VN．RMG一1．1lFUT组对应m值明显低于VN．RMG．1组； 5、RMG．1和RMG．1-hFUT细胞与VN粘附后细胞相对凋亡坏死率较粘附前明显 下降。 6、四组细胞相对凋亡坏死率由高到低依次为：RMG．1、VN—RMG．1、 RMG．1．hFIJT、VN．RMG．1-hFIJT。 2 7、抗Lewis 7、抗Lewis Y抗体、抗整合素舛抗体、抗整合素邸抗体阻断四组细胞， RMG．1．hFUT组、VN．RMG．1．1lFUT组细胞相对凋亡坏死率均明显增高，但 RMG．1组和VN．RMG．1组细胞相对凋亡坏死率无明显变化，而VN—RMG．1 组的相对凋亡坏死率仍较RMG．1组低。 8、影响细胞凋亡率下降程度由高到低依次为抗Lewis Y抗体，抗整合素(IV抗体， 抗整合素邸。 第二部分 1、Topo．II Q表达在四组中均无明显变化。 2、Topo-I、Topo—II p在RMG—l—llFUT组中的表达均比RMG．1组高。 3、Topo．I在RMG．1组和VN．RMG．1组、RMG—l—hFUT组和VN．RMG—1．11FUT 组表达均无明显变化。 4、Topo-II B在RMG．1组和VN．RMG．1组中表达无明显变化，