Genistein抑制由HSV1感染导致的人星形胶质瘤细增殖和凋亡异常.docx

青岛大学 硕士学位论文 Genistein抑制由HSV--1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和凋 亡异常 姓名：王倩 申请学位级别：硕士 专业：人体解剖与组织胚胎学 指导教师：于向民Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和 Genistein抑制由HSV-1感染导致的人星形胶质瘤细胞增殖和 凋亡异常 摘要 目的： l 建立人单纯疱疹病毒I型(Herpes simplex virus，HSV-1)感染人星形胶质瘤细 胞U251模型。研究HSV-1感染对U251细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。 2 研究Genistein(GST)对HSV-1感染导致的U251细胞增殖和凋亡异常的抑制 作用。 材料和方法： l 以MOI(multiplicity ofinfection)为5的HSV-1感染U251细胞，观察细胞形态 学的改变。MTr比色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化； Guava Nexin@ Reagent试剂盒流式细胞术检测细胞凋亡比率的变化；PI染色流式细胞仪检测细胞 周期的变化。 2 设立GST组、GST+HSV-1组、HSV-1组和对照组，采用形态学观察、MTT比 色法检测HSV-1感染后U251细胞增殖的变化。Guava Nexin@Reagent试剂盒流式 细胞术和RT-PCR方法分别检测感染12h、24h和36h后GST(1599／m1)组、 GST+HSV-1(151xg／m1)组、HSV-1组和对照组U251细胞凋亡比率的变化和gD mRNA的表达情况。 飞 结果： 1 对照组U251细胞胞体细长，突起延展充分，HSV-1组U251细胞在感染24 h 后出现细胞融合；48 h后出现细胞病变效应。MTT法结果显示HSV-1组OD值始 终低于对照组(尸O．05)。Annexin W7．AAD双染流式细胞术显示HSV-1感染后12h． 24 h，36 h U251细胞凋亡率高于相应对照组(尸O．05)。PI染色流式细胞仪结果显 示，感染12 h，24h和36hS期细胞始终高于对照组(P0．05)；Go／Gl期细胞低于 对照组(P0．05)。24 h后，G2／M期细胞比率开始高于对照组(P0．05)。 2 MTT比色法结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义(严510．743，P0． 05)，并有明显的时间效应(，=2243．2，PO．05)。15}tg／ml GST+HSV-1组M11r 均值高于HSV-1组均值俨0．05)。形态学观察显示HSV-1组感染12h后出现融合， 36h后出现细胞病变效应。15}I劝：nl GST+HSV-1组细胞感染12h后未见明显病变； 24h后局部出现少量融合；36h后融合增多，但多数细胞仍为正常形态。Annexin V／7．AAD双染流式细胞术结果显示处理组之间的差别具有高度统计学意义(， =1788．58，PO．05)，并有时间效应(F=766．478，PO．05)。GST+HSV-1组凋亡 =1788．58，PO．05)，并有时间效应(F=766．478，PO．05)。GST+HSV-1组凋亡 率均低于HSV-1组(PO．05)。RT-PCR结果显示HSV-1组在感染6h即能检测到 gO mRNA的表达；GST+HSV-1组在感染12h内gO mRNA几乎不表达，24h后才 出现目的条带。 结论： 1 U251是HSV-1的完全容许细胞。 2 HSV-I感染可导致U251细胞增殖，凋亡和细胞周期的异常。 3 GST能够抑制HSV-1感染所致的U251细胞增殖和凋亡的异常。 4 GST能够在HSV-1感染早期抑制gO mRNA的表达。 硕士研究生王倩(人体解剖组织胚胎学) 指导教师 于向民教授 关键词：人单纯疱疹病毒I型；Genistein；人星形胶质瘤细胞；细胞增 殖；细胞凋亡 课题来源：国家自然科学基金支持81070501)： 青岛市科技局资助项目(08一卜3—30-jch) 山东省“病原生物学”泰山学者工程资助项目 Inhibitory Inhibitory Effects of Genistein on Abnormal Changes of Proliferation and Apoptosis caused by HSV-1 in Human Glioma Cells Abstract objective： 1 To establish an伽vitro Herpes simplex virus-1(HSV-1)infection model of human glioma cells(U25 1)and investigate the effects of HSV-1 o