GLP1对HepG2细胞糖异生关键酶6Pase的影响及作用机制分析.docx

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 1．体外培养人肝肿瘤细胞HepG2细胞系，通过倒置显微镜观察细胞形态变化。 2．研究胰高血糖素样肽一1(glucagon—like peptide-1，GLP一1)对HepG2细胞 糖异生的作用及机制一P13K通路。 3．为GLP．1有效的降糖和改善肝胰岛素抵抗等临床治疗提供初步的理论依据。 方法： 1．体外培养人肝肿瘤细胞-HepG2细胞，通过倒置显微镜形态学观察。 2．将培养的HepG2细胞随机分为4组：Control组，GLP—l(10nmol／L)组， Insulin(10nmol／L)组，Exenatide(10nmol／L)组，除Control组外，其它三组分别 干预4、8、24小时。Western blot方法测糖异生关键酶葡萄糖一6一磷酸酶 (glucose-6．phosphatase，G6Pase)的蛋白表达，选出合适的干预时间。 3．将培养的HepG2细胞随机分为9组：(芏)Control组，(墓)hsulin(10nmol／L)组， ③GLP．1(10nmol／L)组，@Exenatide(10nmol／L)组，⑤LY294002(1S岬oⅢ组，⑥ GLP．1(10nmol／L)+Insulin(10nmol／L)组，OExenatide(10nmol／L)+Insulin(10nmol／ L)组，⑨GLP一1(10nmol／L)l+LY294002(15pmol／L)组，(蓟Exenatide(10nmol／L)+LY 294002(15pmoUL)组。干预一定时间后(时间待定)，用蛋白质印迹(westernblot) 法测定各组G6Pase的蛋白表达。 4．将培养的HepG2细胞随机分为3组：(至)Control组(5．6mmol／L葡萄糖)，② 10mmol／L葡萄糖组，③20mmol／L葡萄糖组。干预一定时间后(时间待定)， westernblot法测定各组G6Pase的蛋白表达。观察葡萄糖对G6Pase的影响。 勿}申． =口7卜· 1．HepG2肝细胞传代培养情况良好。 2．western blot结果表明：与Control组比，GLP-1组、Insulin组、Exenatide 组G6Pase的蛋白表达量较低，干预8小时后降低最明显，所以下一步实验干预 时间选择8小时。 ’孓卜 3．(1)与Control组比，Insulin、GLP．1、Exenatide均能降低Hep园r2肝细胞 G6Pase的蛋白表达量◇o。05)，表明Insulin、GLP．1、Exenatide都能抑制肝糖 异生。 (2)与Insulin组比，GLP．1+Insulin组和Exenatide+Insulin组G6Pase的蛋 天津医科大学硕士学位论文自表达量少◇0．05)。说明GLP．1、Excnatid,对G6Pase的抑制与Insulin有叠加 天津医科大学硕士学位论文 自表达量少◇0．05)。说明GLP．1、Excnatid,对G6Pase的抑制与Insulin有叠加 作用，GLP．1、Exenatide调节肝糖异生代谢的通路可能与胰岛素不完全一致。 (3)与GLP．1组比，GLP．1+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增加(萨O．05)； 与Exenatide组比，Exenafide+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增／jn(po．05)， 说明PBK通路介导了GLP．1、Exenatide对肝糖异生的调节。 4．与5．6mmol／L葡萄糖组比，10mmol／L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量无明 显变化，20mmol／L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量明显增加◇o．05)。说明高糖 可以促进肝细胞的糖异生或糖原分解作用。 结论： 本研究通过体外试验验证了GLP．1、Exenatide可直接作用于人肝细胞，调 节肝糖异生代谢。试验结果也证实了GLP．1、Exenatide通过减少肝细胞G6Pase 的合成，抑制非糖物质转化为糖，减少糖异生。在GLP．1、Exenatide干预的同 时给予PBK阻断剂LY294002后，人肝细胞G6Pase的表达量下降，肝糖异生作 用受抑制。由此可知，GLP．1、Exenatide抑制人肝细胞糖异生的作用可能部分通 过激活PBK通路，增加Fox01(forkheadbox，Fox)因子(FoxOl因子可以抑制 G6Pase基因表达)的表达从而下调G6Pase的基因表达，而使G6Pase蛋白合成 减少。高浓度葡萄糖增加G6Pase蛋白表达，使糖异生增加。 关键词：胰