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MicroRNA-214对H2O2损伤L6骨骼肌成肌细胞增殖和凋的影响
河北医科大学
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研究生签名躺导师签章:勿瞄哏二级学院领导盖章
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研究生签名:秀逸玩靖 导师签章:叼妖
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万方数据
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目 录 Y2785409
中文摘要 .1
英文摘要 .5
英文缩写 lO
研究论文MicroRNA.214对H202损伤L6骨骼肌成肌细胞增殖 和凋亡的影响
前言日U吾 .1.11l
材料与方法 .12
结果 28
附图 32
附表 49
讨论 .58
结论 62
参考文献 63
综述MicroRNA.214与细胞增殖和凋亡 ..66 致谢 74
个人简历 75
万方数据
中文摘要
M i croRNA-21 4对H20。损伤L6骨骼肌成肌细胞 增殖和凋亡的影响
摘要 目的:心肌梗死是冠状动脉闭塞,血流中断,使部分心肌因严重的持
久性缺血而发生局部坏死所引起的病症,严重威胁人类健康。在心梗区会
产生较多的活性氧化物,使得心肌发生氧化应激反应最终导致心肌细胞凋 亡,其中H202是较常见的活性氧化物。由于心肌是终末分化细胞,一旦 损伤后只能由纤维组织所代替,常规治疗手段不能逆转已经坏死的心肌细 胞。而干细胞移植治疗心肌梗塞被认为是前景光明的治疗手段,其中骨骼 肌成肌细胞与心肌细胞都来源于中胚层,具有可以自体移植等理想特性, 移植治疗心梗效果显著。但移植细胞在宿主心肌中的存活率直接影响了治 疗效果,经实验证实移植后3天内70%一80%的移植细胞死亡,其最主要的 原因是在缺血环境下发生氧化应激而引起的细胞凋亡。近些年一些研究发 现,microRNAs(miRNAs)对细胞的增殖、分化、凋亡等过程有一定的调控 作用,而且不同的miRNAs的作用也不尽相同,其中miRNA.214(miR.214) 是miRNAs家族的重要成员。研究表明miR-214对氧化应激损伤的心肌 具有一定的保护作用,对正常成肌细胞增殖分化也有调节作用。因此本实 验拟建立体外L6骨骼成肌细胞(L6 Skeletal Myobalst,L6SKM)H202损伤 模型,观察miR.214在不同损伤条件下的表达调节,并通过提前给予 miR.214前体和抑制剂,上调和下调miR-214的表达,观察成肌细胞在氧 化应激条件下的增殖与凋亡变化,并探讨其机制。
方法: lmiR.214对L6SKM增殖的作用
体外培养L6SKM,状态良好时转染miR.214,实验分为五组(正常 对照组、pre.miR.2 1 4组、pre.scramble组、anti.miR-2 1 4组、anti.scrambl e组,24小时后进行后续实验),通过实时定量PCR法(qPCR)测定各 组中miR.214的表达,MTT比色法检测各组细胞活力,免疫细胞化学技
术检测各组细胞中PCNA和cyclinDl的表达,流式细胞术检测各组细胞 细胞周期的变化,计算增殖指数(PI)。
万方数据
中文摘要
2分化培养不同时间,L6SKM中miR一214、myo D、myogenin的表达 体外培养L6SKM,细胞生长状态良好,当细胞融合到60%.70%时换 2%马血清的培养基,分别分化培养0天、2天、4天、6天。通过实时定
量PCR法(qPCR)测定各组中miR-214、myo D、myogenin的表达。 3转染miR-214后再分化培养不同时间L6SKM中miR.214、myo D、
myogenin的表达 体外培养L6SKM,状态良好时转染miR.214,实验分为五组(正常
对照组、pre.miR.2 1 4组、pre.scramble组、anti.miR-2 1 4组、anti.scramble 组),转染后孵育24小时,换2%马血清的培养基,分别分化培养0天、 2天、4天。通过实时定量PCR法(qPCR)测定各组中miR.214、myo D、 myogenin的表达。
4不同浓度不同时间H202对L6SKM的作用 体外培养L6SKM,实验分正常对照组(normal contr01),H202作用组
(H202浓度分别是50
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