miR1423p对奶牛乳腺上皮细胞乳功能的调控作用.docx

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：no NO．：120910816 Dissertation for the Master Degree Regulation of miR—·1 42—-3p to Lactation of Dairy C ow Mammary Epithelial C ells Candidate：Yu 1ei Supervisor：Professor Li Qingzhang Degree Category：Master of Science C ollege：College of life science First level discipline：B iology Second level discipline：Biochemistry and Molecular Biology Harbin China June 2015 万方数据 目 目 录 呲Y㈣盯 呲7 哪2㈣3㈣心 哪6 皇 目 录 摘要 一I 英文摘要 III 1前言 _ l 1．1miRNAS的研究进展 ．1 1．1．1 miRNAs的发现 】 1．1．2 miRNAs合成和作用机制 1 1．1．3 miRNAs的检测技术 一 ．．2 1．1．4 miRNAs与奶牛乳腺发育的研究现状 ．3 1．2 miR．142．3P的研究进展 ．4 】．3 PRLR的研究进展 一4 1．4研究的目的和意义 ．4 2材料与方法 一5 2．I实验材料 一5 2．2主要仪器和设备 ．5 2．3实验试剂和耗材 ．6 2．4实验方法与步骤 7 2．4．1 miR．142．3p在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达状况 10 2．4．2奶牛乳腺组织中PRLR定位及表达状况 7 2．4．3 miR．142．3p靶基因的预测 ．10 2．4．4奶牛乳腺上皮细胞培养和鉴定 一lO 2．4．5 miR．142．3p mimics转染对奶牛乳腺上皮细胞的影响 12 2．4．6 miR．142．3p inhibitor转染对奶牛乳腺上皮细胞的影响 18 2．5数据处理与统计分析 19 3结果 ．20 3．1 miR一142．3p在不同乳品质奶牛乳腺组织中的表达 ．20 3．2不同乳品质奶牛乳腺组织中PRLR定位及表达情况 一20 3．3 miR．142．3p的靶基因的预测 2l 3．4奶牛乳腺上皮细胞的培养和鉴定 2l 3．5 miR．142．3p mimcs转染后对奶牛乳腺上皮细胞的影响 ．．23 3．5．1miR-142—3p mimics转染后奶牛乳腺上皮细胞中miR一142—3p、prlr基因的表达变化 ． ． ．． ． ． ． ． ：13 3．5．2 miR．142-3p mimics转染后奶牛乳腺上皮细胞中PRLR的表达变化 24 3．5．3 miR一142-3p mimics转染后奶牛乳腺上皮细胞中PRLR蛋白及泌乳通路蛋白的表达 变化． ． ． ．．24 3．5．4 miR．142．3p mimics转染后对奶牛乳腺上皮细胞细胞周期的影响 25 万方数据 东北农业大学理学硕士学位论文3．5．5 东北农业大学理学硕士学位论文 3．5．5 miR．142．3p mimics转染后对奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖的影响 26 3．5．6 miR-142．3p mimics转染后对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响 27 3．5．7 miR．142—3p mimics转染后对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯分泌的影响 28 3．5．8 miR．142．3p mimics转染后对奶牛乳腺上皮细胞乳糖分泌的影响 30 3．6miR．142．3pinhibitor转染后对奶牛乳腺上皮细胞的影响 30 3．6．1miR．142．3p inhibotor转染后奶牛乳腺上皮细胞中miR．142．3p、prlr基因的表达变化 ．． ． ．，． ． ． ． ． ， ． ．． ． ． ． ．3() 3．6．2 miR．142．3p inhibitor转染后PRLR在奶牛乳腺上皮细胞中的表达变化 一31 3．6．3 miR．142．3p inhibitor转染后奶牛乳腺上皮细胞中PRLR蛋白及泌乳通路蛋白的表达 变化 ．32 3．6．4 miR．142．3p inhibitor转染后对奶牛乳腺上皮细胞细胞周期的影响 ～33 3．6．5 miR．142．3p inhibitor转染后对奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖的影响 一3‘ 3．6．6 miR．142．3p inhibitor转染后对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响 ．35 3．6．7 miR．142—3p i