miR141调控OP小鼠BMSCs成骨分化机制及健骨颗粒预作用研究.docx

目 目 录 中英文缩略表 。Ⅵ 中文摘要 VII ABSTRACT ． X 前日Ⅱ 言百 1 第一部分Mm．141调控oP小鼠BMSCS成骨分化机制研究 7 实验一MIR-141(内源性表达)与绝经后骨质疏松症的相关性研究 7 1 研究目的 ．7 2实验材料 ．7 2．1实验动物 7 2．2实验材料和试剂 7 2．3实验仪器 7 3实验方法 8 3．1 PMOP小鼠骨质疏松模型的建立 8 3．2 PMOP小鼠骨质疏松模型的鉴定 8 3．3 BMSCs细胞的培养 9 3．4 BMSCs细胞的鉴定 ．．9 3．5 BMSCs细胞增殖能力比较 10 3．6 miR．141内源性表达状况 10 3．7统计学处理分析 ．．12 4实验结果 ．12 4．1模型鉴定结果 ．12 4．2 BMSCs细胞形态观察及鉴定结果 15 4．3 BMSCs细胞生长情况比较结果 17 4．4两组BMSCs中miR-141 mR．NA表达检测结果 ．．19 5讨论 ．．20 6，J、结 。 ．． ．23 实验二MIR-141及成骨基因DLXS／Msx2／RUN】X2在BMSCs成骨分化过程中的表达 情况及变化趋势 。24 1 研究目的 24 2实验材料 ．24 2．1实验细胞 ～24 2．2实验动物 ．24 2．3实验材料和试剂 。24 2．4实验仪器 。25 万方数据 3实验方法 3实验方法 25 3．1 BMSCs细胞的培养、鉴定、增殖能力 25 3．2 BMSCs细胞成骨能力比较 25 3．3实时荧光定量PCR检测miR-141及成骨基因D1)(5、Msx2、Rtmx2的表达 一26 3．4 Western Blot检测成骨基因Dlx5、Msx2、Runx2蛋白的表达 ．29 3．5统计学处理分析 。30 4实验结果 ．30 4．1 BMSCs细胞形态观察及鉴定结果 30 4．2 BMSCs细胞成骨能力比较结果 3 1 5讨论 ．．37 6，J、结 ．．40 实验三MIR-141调控BMSCs成骨分化过程I)LXf／Msx2／RuNx2信号轴的作用 机制 4l 1 研究目的 41 2 实验材料 41 2．1实验药物 ．41 2．2实验材料和试剂 。41 2．3实验仪器 ．．41 3实验方法 41 3．1细胞转染 ．．41 3．2转染效率的鉴定 42 3．3转染对BMSCs成骨分化能力的影响 42 3．4 mill．141靶基因验证 。42 3．5统计学处理分析 一42 4实验结果 ．43 4．1转染效率的检测结果 ．43 4．2转染对BMSCs成骨分化能力的影响结果 一46 4．3成骨诱导13天成骨基因和蛋白表达结果 47 4．4 miR-141与D1)(5靶基因验证结果 51 5讨论 ．．51 6，J、结 ．．54 第二部分健骨颗粒干预oP小鼠BMSCS成骨分化机制研究 ．55 实验四健骨颗粒含药血清干预实验 。55 1 研究目的 。55 2实验材料 55 2．1实验药物 ．55 2．2实验动物 ．．55 2．3实验细胞 ．55 2．4实验材料和试剂 ．55 lII 万方数据 3实验方法 3实验方法 ．55 3．1含药血清制备 ．55 3．2 BMSCs细胞培养和鉴定 55 3．3健骨颗粒含药血清干预实验 一55 3．4统计学处理分析 一56 4实验结果 。 ．56 4．1细胞表型鉴定结果 一56 4．2健骨颗粒含药血清BMSCs最佳干预浓度选择结果 57 4．3 10％含药血清干预成骨诱导小鼠BMSCs细胞分化的观察结果 57 4．4含药血清干预BMSCs细胞成骨能力比较结果 58 4．5实时荧光定量PCR及Western Blot检测成骨基因、蛋白的表达结果 ．59 5 讨论 ．．62 6 d、结 ．．65 实验五健骨颗粒在体干预实验 ．66 1 研究目的 66 2实验材料 “ 2．1实验药物 ．66 2．2实验动物 ．66 2．3实验材料和试剂 66 2．4实验仪器 。66 3实验方法 ．“ 3．1建立PMOP小鼠模型 ．．66 3．2药物干预方法 一66 3．3 microCT骨组织三维图像及骨质疏松指标检测 ．67 3．4骨组织形态学比较 ～67 3．5骨生物力学检测 。67 3．6实时荧光定量PCR对骨组织miR-141及成骨基因DLx5、Msx2、Runx2的检测 68 3．7 Western Blot对骨组织Dlx5、Msx2、Runx2蛋白的检测 70 3．8统计学处理分析 。70 4实验结果 。70 4．1 microCT检测结果 70 4．2骨生物力学实验结果 ～74 4．3骨组织成骨基因RT-PCR及Western Blot检测结果 75 5讨论 ．．78 6 d、结 ．．82 结