miR146通过靶定IRS2表达影响食管鳞癌生物学行为的机制研究.docx

山东大学博士学位论文CONTENTS 山东大学博士学位论文 CONTENTS ChineseAbstract ．．1 English Abstract ． ．5 Symbolic Description ．10 Part one 12 Introduction 1：! Materials and Methods ．13 Results 19 Discussion ．20 References 23 Tables and Figures ．．28 Part two 30 Introduction ．．30 Materials and Methods ．．．．．． ． ．．．．． ．．．．．． ．． ． ．31 Results ．．46 Discussion ．z19 References．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 52 Tables and Figures ．．．．． ． ．． ．．．． ．． ．． ．．．．．． ．．59 Conclusion 6zl Review 1． ． ．． ．．． ．．．． ．．． ．．．． ． ．． 65 Review 2 ．．75 Acknowledgement ．85 List ofarticles published． ．．．．．． ． ． 86 Comment and defence about the paper． ．．87 English article one ． ． ．．．88 English article two ．．102 万方数据 山东大学博士学位论文miR．146a通过靶定I 山东大学博士学位论文 miR．146a通过靶定I RS2表达影响食管鳞癌生物学行为的机制研究 博士研究生：刘海波 导 师：刘相燕教授 专 业：临床医学(外科学·胸外科) 中文摘要 告警 士 日盯 吾 食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)作为我国常见的消化道恶性 肿瘤，具有病死率高、治疗效果差的特点。目前ESCC的发病率仅次子肺癌、胃癌和肝 癌。ESCC病因复杂，主要涉及吸烟、饮酒、流经食物过热、食管反流与遗传等因素。 因此，ESCC的生物学标记物筛选和信号通路的阐明对ESCC诊疗具有重大意义。众所 周知，细胞信号通路传导需要细胞因子刺激，进而通过胞膜或胞内受体传导到核内，调 节相关基因表达，参与细胞的各种生理病理活动。在ESCC的过程中，细胞增殖起着重 要的作用，ESCC发生发展时期，细胞增殖旺盛，伴随着各种增殖相关通路的紊乱。体 内多种信号分子已被证实参与肿瘤细胞增殖过程。因此，对于细胞信号通路中关键分子 的研究成为ESCC分子机制以及治疗的研究热点。 微小RNA(microRNA，miRNAs)是一类长度在21～25个核苷酸的非编码RNA， 由基因组转录调控，并在转录后水平控制基因表达，进而参与炎症、免疫应答、细胞增 殖与凋亡等。随着eDNA文库、分子克隆技术、RNA组学及生物信息学预测的不断发 展，miRNA在基因调控中的地位越来越突出，很多热点miRNA已经在临床疾病诊断、 治疗和预后的分析中得到应用。目前的研究报道均表明，miRNAs与肿瘤疾病的发生发 展紧密关联，其中，miR．146a是众多科学家研究的重点。必威体育精装版的成果表明，TOLL样受 体TLR2／4／5的配体以及TNF．Q、IL．1等炎症因子都是通过NF．r,B依赖的途径上调 miR．146a的表达，上调后的miR．146a进而抑制TRAF6等蛋白上调，进一步影响NF．r,B 的蛋白活性，从而减少NF．rd3通路下游TNF．a、IL．113、IL．6等炎性因子生成，阻止过 度免疫反应。 另外，胰岛素受体底物(insulin receptor substrate，IRS)是近年来发现的胰岛素信号通 路中一个重要蛋白。迄今为止，研究证实IRS具有四个亚型，其中，IRSl和IRS2尤为 关注。IRSl广泛分布于胰岛素作用的所有外周组织，如骨骼肌、脂肪和肝脏，其主要 万方数据 山东大学博士学位论文在骨骼肌中表达。目前，人类和鼠IRSl的氨基酸序列已经证实具有高度种属性和组织 山东大学博士学位论文 在骨骼肌中表达。目前，人类和鼠IRSl的氨基酸序列已经证实具有高度种属性和组织 保守性。IRSI的N末端有两个保守的结构域，包括PH(pleckstrin homology)_；ffl PTB(phosphot)，rosine binding)。PH结构域介导磷脂与含有酸性结构的蛋白相互作用。PTB 结构域能够识别磷酸化NPXY的酪氨酸残基，使IRSl能够和IGF．1R和胰岛素受体IR 近膜区的Tyr950或Tyr960发生耦联。总之，IRSl在机体的外周组织代谢、细胞