miR17家在肿瘤生长和迁移中的作用及机制.docx

杭州师范大学硕上学位论义 杭州师范大学硕上学位论义 致谢 致谢 时光飞逝，转眼间已经临近研究生毕业．在杭州师范大学的三年的学-j生活 中，不仅让我在实验技能和个人能力等方面得到锻炼和提高，而且让我有幸结识 了很多对科研充满热情的老师和同学们，临近毕业，我要向所有给与我帮助的老 师、师兄师姐们、同学们和亲朋好友致以真挚的感谢和崇高的敬意! 首先，我要感谢我的导师丛羽生教授．感谢老师长期以来对我的耐心指导和 悉心关怀。从论文选题、实验设计、提高操作技术、论文的写作到个人能力的培 养等，每一个环节都饱含着恩师的殷切关怀和帮助。此外，恩师科学严谨的科研 态度，孜孜不倦的探索精神，耐心细致的谆谆教导，以及绅士儒雅的做人风格， 感染激励着我不断前进，也带动了我的学-7劲头，让我明白了如何科学有效地规 划实验设计，更高效率的工作，也更懂得了如何进行今后的职业规划，令我受益 良多。 同样，我要感谢王苗老师在实验技术、文献检索和阅读、论文撰写与修改等 遇到困难时对我莫大的帮助、指导和鼓励；她在我进行实验和完成毕业论文期间 给予我极大的帮助，帮助我分析实验过程中遇到的每一个问题，耐心地指导我每 一步的实验操作!非常感谢刘宁老师、刘江、管娣老师给予的科研帮助、耐心指 导以及便利的实验条件等。 此外，非常感谢实验室全体同仁营造的温馨氛围和辛勤付出．感谢吕赫哲、 吴晓颖、常翠翠、武长杰、李涛、曾令花、郝婉钰、吴振华、刘婷等的帮助和交 流。 再者，非常感谢亲爱的家人和挚友们默默的支持、关心、鼓励和信任，让我 奋勇前进，潜心学习!我爱你们! 最后，由衷感谢百忙之中审阅和指正我的论文，以及参加答辩会的老师们． 辛苦了，谢谢你们! Ⅳ 万方数据 杭州师范人学硕{j学位论文 杭州师范人学硕{j学位论文 刖商 前言 MicronNAs(miRNAs)是大小长约20’25核苷酸，在真核生物中发现的具有 功能调控的一类内源性非编码RNA。研究表明miRNA通过与靶基因mRNA的3’UTR 区域互补配对结合或者直接结合于靶基因mRNA来调控靶基因的表达或直接降解 靶基因。miRNA可以调控靶mRNA的加工和稳定性，是基因表达的重要转录后调控 器。经验证miRNA几乎参与所有的细胞过程，包括细胞增殖、分化、发育和凋亡 n3。包含miRNA的生物学通路也同样参与到组织发育。此外，miRNA的调控参与 多种人类疾病，包括癌症。 miRNA作用机理 miRNA基因在RNA聚合酶Pol II的作用下合成带有颈环的发夹状miRNA初 级单链产物，该初级产物部分碱基互补配对，不能配对部分形成环状结构。在核 酸酶Drosha和其辅助因子Pasha的作用下，5’端为7MGpppG、3’端为polyA (AAAAA)的初级转录产物pri-mRNA，被切去5’帽子结构和3’多聚腺苷酸尾 部结构乜3。形成次级转录产物pre—miRNA，以上过程都是在核内完成b3。次级转 录产物Pre-RNA在核内由RNA-GTP、ExportJn5转运复合物的作用下，转运到细 胞质口1。在细胞质中，次级转录产物pre-RNA在核酸酶Dicer的作用下，切开一 端的颈环，形成miRNA+miRNA duplex双链部分互补结构。这种双链被分开后， 其中一条形成18-25bp大小的成熟miRNA，这种成熟的miRNA被整合入miRISC 沉默复合物行驶其功能侣3。其中，miRNA与靶基因的mRNA完全互补配对时(在植 物中比较常见)，miRNA一般作用于靶基因mRNA的开放阅读框，会使靶基因的 mRNA降解，从而起到阻碍下游反应的过程。当miRNA与靶基因的mRNA部分互补 配对时(在哺乳动物中比较常见)，miRNA通常作用于靶基因mRNA的3’UTR区 域，从而起到抑制靶基因转录的作用。而这些过程一般是在细胞质中完成∞3。 miRNA主要起到抑制下游基因转录、表达的作用，而miRNA发挥其作用主要 是通过沉默复合物RISC来完成的。沉默复合物RISC一般包括两种类型，不切割 型和切割型。而一般认为RISC中的AGO蛋白决定了沉默复合物是切割型还是不 切割型n1。而沉默复合物的具体作用机制仍然在继续探索中。 miR-17家族 V 万方数据 杭州师范人学硕L学位论文 杭州师范人学硕L学位论文 刖看 miRNAl7 家族是一组调控基因表达的相关的小的非编码RNA，该家族包括 miR一20a／b．miR一93，and miR一106a／b，miR一1 7-5p，miR-18a／b，他们分别产生于 不同的基因簇，但在进化上具有高度的保守性，可能来自予相同的起源”。这些 基因簇以长的非编码麟A的形式送行转录，之后被处理成70个核苷酸大小的前 体，进一步通过Dicer酶的处理产生一个22个核苷酸的产物，成熟的mjcr