miR59对肺癌细胞生物学功能的初步研究及其在肺癌血清中的表达.docx

大连医科大学硕士学位论文目 大连医科大学硕士学位论文 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 5 第一部分miR-569对肺癌细胞生物学功能的初步研究 (一)前言 5 (二)材料和方法 ．．7 (三)结果 ．．15 (四)讨论 ．．23 (五)结论 ．．24 (六)参考文献 ．25 第二部分miR-569在肺癌患者血清中表达情况的探讨 (一)前言(一)日U舌 ．．28．．Z8 (二)材料和方法 ．28 (三)结果 ．．31 (四)讨论 ．．32 (五)结论 ．．34 (六)参考文献 ．34 第三部分临床病例分析 (一)病例摘要 ．36 万方数据 大连医科大学硕士学位论文(二)讨论 大连医科大学硕士学位论文 (二)讨论 ．．38 三、综述 ．39 (一)综述 ．-39 (二)参考文献 ．43 四、附录 ．47 五、致谢 。49 万方数据 大连医科大学硕士学位论文m 大连医科大学硕士学位论文 m i R-569对肺癌细胞生物学功能的初步研究 及其在肺癌血清中的表达 硕士生姓名：郑意萍 指导教师：王衍富教授 专业名称：老年医学 摘要 目的：肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居世界首位。虽然近年 来，以手术为主，放化疗为辅的治疗手段不断发展，但总体治疗效果仍欠佳。其 主要是因为大部分肺癌患者临床诊断已属中晚期，且肿瘤转移和多药耐药的现 象。因此，亟需寻找一种可靠的早期诊断生物标志物和有效的治疗方案。目前， microRNA(miRNA)与肿瘤的研究不断涌现，有望成为新型的抗癌武器。miR一569 定位于3号染色体(3q26．2)，作为3q26．2扩增子的一部分，可参与调节乳腺癌 和卵巢癌细胞的生存和增殖。而3q26．2扩增也是肺癌最常见的染色体畸变之 一，miR一569在肺癌中的表达及作用机制至今未见报道。本实验首次揭示了miR一 569在肺癌细胞中的表达情况及其对肺癌生物学特性的影响和可能的机制。在此 基础上，为了深入了解血清中miR-569的表达情况，我们检测了肺癌患者的血清 中miR一569的表达。 方法： 1．应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法检测肺癌细胞(A549、HCC827、 H1299、95D)和正常肺支气管上皮细胞(HBE)中miR一569的表达。 2．为了明确miR-569对肺癌生物学特性的影响，在肺癌细胞A549中成功转染 miR一569模拟物(mimics)后，用CCK一8细胞增殖试剂盒和凋亡试剂盒分别检测 miR一569对A549细胞增殖和凋亡的影响。细胞划痕实验检测miR一569对A549细 胞迁移的影响。 3．为了进一步研究miR一569对肺癌的作用机制，首先借助生物信息学分析筛 选出miR一569可能的靶基因。而后通过qRT—PCR和免疫印迹实验(Western 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Blot)进一步验证miR一569对A549细胞c—FOS和高迁移率族蛋白A2(High 大连医科大学硕士学位论文 Blot)进一步验证miR一569对A549细胞c—FOS和高迁移率族蛋白A2(High mobility group A2，HMGA2)基因和蛋白表达的影响。 4．2015年4月至2015年9月于大连医科大学附属第一医院验科收集78例肺 癌患者及正常对照者的血清标本，通过qRT—PCR检测肺癌患者相对于正常对照的 血清中miR一569表达量，结合检测结果及临床资料，采用非参数秩和检验、卡方检 验及独立样本t检验，分析其在肺癌血清中的表达情况。 结果： 1．miR一569在肺癌细胞(A549、HCC827、H1299、95D)中的表达水平明显低 于正常的肺上皮细胞(HBE)。 2．成功转染miR一569 mimics的肺腺癌A549细胞的增殖受到抑制，凋亡率 增加，而且细胞迁移也被阻遏。 3．A549细胞被成功转染miR-569 mimics 48h后，细胞中miR一569表达水平 显著上调，而c—FOS、HMGA2的mRNA表达水平显著降低，且c—FOS、HMGA2蛋白水 平也显著降低。 4．肺癌血清中miR一569的表达与正常对照者的血清相比有差异无统计学意 义。 结论： miR一569在肺癌细胞中的表达与正常的肺支气管上皮细胞相比明显下调，且 通过靶向调节c—FOS和HMGA2在肺癌细胞中起着抑癌基因的作用。miR一569有望 成为肺癌治疗的一个新的靶点。肺癌血清中miR一569的表达与正常对照组相比无 统计学差异，不能作为肺癌早期诊断的生物标志物。 关键词： miR-569 肺癌 抑癌基因 c-FOS 毗 万方数据 大连医科大学硕士学位论文A 大连医科大学硕士学位论文 A preliminary studies about th