MiR9及bcl2 bax在托吡酯治疗颞叶癫痫大海马组织中的表达及意义.docx

一—— 一—— 延垫太堂临废堂瞳亟±堂焦论裒 一 本论文己达到医学硕士学位论文要求 答辩委员会主席 答辩委员会委员 答辩委员会委员墨丝垫主 (印：) 延边大学 20 1 6年5月1 9日 万方数据 墨垫盘堂蝗鏖至堕塑±望焦途塞学位论文独创性声明 墨垫盘堂蝗鏖至堕塑±望焦途塞 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的 研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中 不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何 教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究 所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名： 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制 文档，可以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关 部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部 分内容。对于必威体育官网网址论文，按必威体育官网网址的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．必威体育官网网址 口，在 年解密后适用于本声明；2．不必威体育官网网址回／ 研究生签名：盈堑亟导师签名：盥一日期：丝』纽±月归 万方数据 摘要目的 摘要 目的 本实验是在制备锂．匹罗卡品诱发癫痫模型的基础上，探讨miR．9是 否参与颞叶癫痫的发生、发展过程；miR．9是否参与托吡酯(TPM)抑 制颞叶癫痫大鼠海马神经元凋亡的过程；TPM是否通过调节bcl．2蛋白与 bax蛋白的比值来抑制神经元的凋亡。 方法 1．实验动物及分组：健康的成年雌性及雄性SD大鼠，随机分为4 组：1)正常对照组(n=20)，2)颞叶癫痫组(n=20)，3)TPM低剂 量组(n=20)，4)TPM高剂量组(n=20)。 2．癫痫模型的制备及干预：使用锂一匹罗卡品诱发癫痫，模型动物需 达到IV级以上发作，并持续50分钟以上。对正常对照组和颞叶癫痫组 大鼠每日1次生理盐水40mg／kg灌胃。对TPM低剂量组每日1次TPM40 mg／kg灌胃。对TPM高剂量组每日1次80mg／kg灌胃。 3．取材及实验测定：通过芯片分析及实时定量PCR测定上述四组大鼠 海马中miR．9的差异性表达；．通过蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法测 定上述各组海马组织中·bcl．2蛋白与bax蛋白的比值变化；通过HE染 色观察各组大鼠海马组织中细胞的形态学改变。 结果 1．miRNAs芯片分析结果：与正常对照组相比，癫痫组中有1 2个 miRNAs(miR一207，-204，一466，一511，一2964，-3581，-764，-214，一210，一35l， ．466，．298)是上调的，且有28个miRNAs(miR-9，．101，．136，．872，．154， 一153，-382，一362，一377，一337，-380，-218，一219，-31，一383，一499，一33，-34， 万方数据 ．376，．300，．1 ．376，．300，．1 9，．592，．1 86，．488，．598，．30，-582，．708)是下调的。TPM低 剂量及高剂量组中1 2个上调的miRNAs则出现了下调，28个下调的 miRNAs则发生了上调。其中miR．9是上调较明显的miRNAs之一。 2．实时定量PCR结果：与正常对照组相比，miR．9在癫痫组(SE) 中下调明显(P0．05)。与癫痫组(SE)相比，miR．9在TPM高剂量(TH) 组明显上调(P0．05)。其余组间比较均无明显差异(PO．05)。 3．蛋白免疫印迹法结果：癫痫组的大鼠海马组织中bax蛋白的表达 明显高于正常对照组(P0．01)，而TPM治疗组中bax蛋白表达均下降 (P0．05)，且TPM高剂量组比TPM低剂量组下降的更明显(P0．05)。癫 痫组的海马组织中bcl·2蛋白的表达明显低于正常对照组(PO．05)，TPM 治疗组中bcl．2蛋白表达均升高，且TPM高剂量组比TPM低剂量组升 高的更明显(P0．05)。Bcl．2／bax比值示癫痫组明显低于正常对照组 (P0．01)，与癫痫组相比，TPM治疗组中bel．2／bax比值均升高，且TPM 高剂量组比TPM低剂量组升高的更明显(P0．01)。 4．免疫组化结果：癫痫组中bax+蛋白表达明显多于正常对照组 (P0．0 1)；TPM治疗组的bax+蛋白表达与癫痫组相比减少明显，其中 TPM高剂量组较TPM低剂量组减少更为明显(P0．05)。癫痫组中bcl．2+ 表达略低于正常对照组(P0．05)；TPM治疗组中的bcl．2+蛋白表达与 癫痫组相比明显升高(P0．01)；TPM低剂量组与TPM高剂量组之间 比较差异不明显(P0．05)。正常对照