MRTFA对Tg2576小鼠脑神经元凋亡和自噬的影响及制研究.docx

Real．time Real．time PCR程Western blot技术分别检测凋亡相关基因Bcl．2、mcl．1的mRNA和 蛋白表达，自噬相关基因At95、Beclinl、At97的mRNA表达、及Beclinl和LC3 的蛋自表达。 结果 1。MRTF-A对T92576小鼠学习记忆功叁嘭畴研究：(1)T92576小鬣学习．’记忆能力 缺陷及海马MRTF．A表达水平：与同周龄的野生型C57BL／6J小鼠相比，T92576小 鼠在Morris水迷富孛到达平台的时闻延长，条件恐惧测试中T92576小鼠恐惧不动时 间百分比低于野生型C57BL小鼠(闷．01)。取海马组织检测MRTF．A表达，发现 T92576小鼠态源性MRTF-A水平低于野生型小鼠，有显著统计学差异(闷．01)。(2) 过表达MRTF-A可缓解T92576小鼠的学习记忆障碍：过表达MRTF-A可缓解T92576 小鼠的学习记忆障碍：侧脑室注射慢病毒lib荧光表达较弱，2泣和4pl剂量下可见 明显的荧光表达，41xl剂量组荧光表达水平明显高于其它组。故选取41xl作为进一步 研究海马注射剂量。4瞳MRTF-A幔病毒小鼠脑内注射后，与阴性对照组相比，慢病 毒注射组MRTF-A表达水平在注射后第7天达到最高，到第28天缓慢降低，但仍然 高于同期野生型C57BL小飘脑内的表达水平。慢病毒侧脑室注射一周后，小鼠每隔 7天进行一次旷场实验和环境条件恐惧记忆检测发现，过表达MRTF-A之后小鼠旷 场实验运动总距离没有明湿变化，第28天时中央格停留时间缩短，而第28天后 T92576小鼠条件恐惧实验中恐惧不动时间酉分比相比于对照组明显提高。 2．过表达MRTF-A对T92576小鼠海马区神经元凋亡及自噬的影响及机榭研究：(1) 将49l的慢病毒注射入T92576小鼠侧脑室矮第28天行海马组织HE染色发现，过表 达MRTF．A能明湿减轻T92576小鼠海马神经细胞缺失及细胞核固缩情况；透射电镜 观察海马区自噬小体生成情况发现，LV-MRTF-A处理后T92576小鼠海马区可见发 现有双层膜环绕形成的自噬泡。(2)过表达MRTF．A上调凋亡相关基因Bcl．2、mcl．1 的mRNA和蛋自表达，同时自噬相关基因At95、At96、At97的mRNA表达升高，LC3 I蛋白向LC3II蛋白转化增多，Beclinl蛋白表达上调。 结论 随着T92576小鼠学习记忆能力缺陷的发生，其海马区MRTF．A的表达处于低水 平状态。脑组织过表达MRTF-A可改善小鼠的学习记忆障碍。其机制可髓通过 ll 万方数据 MRTF—A上调抗凋亡基因Bcl一2、mcl一1和自噬相关基因At95、At96、At97的表达， MRTF—A上调抗凋亡基因Bcl一2、mcl一1和自噬相关基因At95、At96、At97的表达， 放面抑制T92576小鬣海马区神经元凋亡，上调神经元自噬水平有关。 关键词：MRTF．A；海马：学习记忆；凋亡；自噬 III 万方数据 Abstractobjective： Abstract objective： The present study was to explore the effect of MRTF—A on neurons autophagy and apoptosis and its possible mechanisms in T92576 mouse hippocampus． Methods： Part重Effect of MRTF-A on the learning and memory function of T92576 mice 1．To investigate the function of learning and memory and the level of endogenous hippocampus MRTF—A ofT92576 mice T92576 mice and wild—type C57BL mice(contr01)were selected after 7 days feeding adaptation。We first access the behavioral manifestations by Morris water maze and conditioned fear test，舭Sh hippocampus tissue were isolated at the end of the experiment． Real-time PCR and Western blot were employed to detect mRNA and protein levels of M求TF．A． 2．Effect of MRT