HIV1包膜糖蛋白gp120s大肠杆菌中的表达纯化和初步应用.docx

英文缩略表第一部分 英文缩略表 第一部分 英文缩略语表 缩略语 英文全称 中文全称 ．Amp Ampicillin 氨苄青霉素 bp Basepair 碱基对 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 cDNA Complementary deoxyribonucleie acid 互补脱氧核糖核酸 DAB Dia minobenzidine’ 二氨基联苯胺 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 SDS Sodium dodeeyl sulfate 十二烷基硫酸钠 ELISA Enzyme．1inked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 MW Molecular weight 分子量 TEMED N，N，N’，N‘．tetra methyl ethylene diamine N,N,N‘N’一四甲基乙二胺 E．coli Escherichiacoli 大肠杆菌 IPTG Isopropylthio—p-D—galactoside 异丙基硫代 13 D半乳糖苷 kda Kilodaltons 千道尔顿 LB Luria．Bertani medium Luria-Bertani培养基 PAGE Polyacrylamide gel eleetropHoresis 聚丙烯酞胺凝胶电泳 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 rpm Revolution per minute 每分钟转数 PMSF pHenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 Iris Tris(hydroxymethyl)aminomethane 三(羟甲基)氨基甲烷 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 ORF Open reading frame 开放读码框 PBS PHospHate-buffered saline 磷酸缓冲盐溶液 摘要V-1包膜糖蛋白gpl 摘要 V-1包膜糖蛋白gpl 20s在大肠杆菌中的表达纯化及初步应用 中文摘要 人类免疫缺陷病毒(HⅣ)是引起艾滋病的病原体，分为两型：HW-1和HP一-2， 主要为H]V-1。它和一般的病毒有明显的差别，首先是其基因组相对复杂，编码更多的 蛋白质来调控病毒潜伏、激活、转录与复制等过程，其次是它在宿主个体内变异迅速。 鉴于H]V-1包膜糖蛋白gpl20是HIV-I的主要抗原成分，是检测HIV抗体诊断试剂盒 的重要组成成分，也是制备抗gpl20单克隆抗体必需的免疫原，应用广泛，意义十分重 大。本研究利用分子生物学手段，将gpl20的部分编码基因(命名为gpl20s)重组到大 肠杆菌的表达载体中，并成功地进行了蛋白表达。 外膜糖蛋I兰lgpl20s的编码基因的克隆和在大肠杆菌中的表达。用聚合酶链式反应 PCR从HIV-1型国际标准株prixm-gpl601拘基因序列中扩增出糖蛋白片段基1玉153rop， 插入质粒pET32a中构成重组表达质粒pET32a-gpl20s，将其转化大肠杆菌BL21后获得了 高效表达，经IPTG诱导表达后，SDS．PAGE和免疫印迹分析其表达产物证实蛋白得到表 达且主要存在于包涵体中，凝胶扫描成像分析证实其表达量占菌体总蛋白的45．35％。在 诱导4个小时蛋白表达量最大，以包涵体的形式表达。包涵体经过洗涤、溶解、复性和 过镍柱后，其纯度达到85％，表明已获得高纯度的目的蛋白。用纯化的重组gpl20蛋白 作为包被抗原，间接ELISA对5份已知HIV阳性血清中的gpl20抗体进行检测，结果表明 该纯化蛋白具有一定的抗原活性，能特异性地与HIV抗体反应。 本研究在大肠杆菌中成功表达Tgpl20s蛋白，为进一步发展HIV诊断试剂，研究 AIDS亚单位疫苗奠定了一定的基础，为研究HIV主要抗原蛋白的性质提供可能，也为制 备HIV-1的诊断抗原和基因工程重组疫苗打下基础。 关键词：人类免疫缺陷病毒1型；gpl20s；基因克隆表达；蛋白纯化。 摘要Expression，purificatio 摘要 Expression，purificationpurilication andanll primaryPrlmary applicationapplication of HIV-11 V 1 gpJzos Abs仃act Human Immunodeficiency Virus(HIV)is the pathogen that causes acquired immunodeficiency syndrome in human．It can be categorized into two types：HIV-1 and HIV-2．HIV-1 i