COPD理论探讨及参芪补肺汤含药血清抑制COPD肺气虚气道平滑肌细胞增殖的分子机理-中医内科学（呼吸内科）专业毕业论文.docx

贵阳中医学院硕士学位论文中文摘要 贵阳中医学院硕士学位论文 中文摘要 目的： 1．整理研究古代医家对COPD认识和张葵主任治疗COPD肺气虚证的临床经验 总结。 2．探求参芪补肺汤抑制COPD肺气虚证气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的分子 机理。 方法： 1．通过阅读经典著作及相关古籍文献，查阅导师论文著作文稿、历届研究生 论文以及拜访请教老师，接受言传身授，跟师随诊、实时采集病历、整理病历等方 式收集整理资料。 2．把SD大鼠随机分为空白组和COPD肺气虚证模型组(采用香烟烟熏复合气 管注射脂多糖方式造模)。无菌取空白组和COPD肺气虚证模型组的SD大鼠气道 平滑肌组织进行消化后进行原代培养，将培养的细胞分为空白组(空白组大鼠气 道平滑肌组织经原代培养细胞)、模型组、中药低剂量组、高剂量组以及氨茶碱 组(后四组细胞为COPD肺气虚证模型大鼠气道平滑肌组织消化细胞)，共5个 组。空白组不予处理：模型组加入香烟提取物(CSE)及正常组血清；中药低剂 量组中加入CSE及中药低剂量组含药血清；中药高剂量组中加入CSE及中药高剂 量组含药血清；氨茶碱组中加入CSE及氨茶碱。采用增殖细胞核抗原(PCNA)细 胞免疫组织化学检测大鼠ASMCs增殖；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测大鼠ASMCs 增殖活性；用免疫组化和Western blot法检测各组ASMCs中HDAC2、乙酰化组 蛋白H4以及NF-KBp65蛋白的表达；用实时荧光定量PCR方法检测各组ASMCs 中HDAC2mRNA以及NF—kBp65mRNA的表达。 结果： 1．导师对COPD肺气虚证病机的认识为肺、脾、肾三脏亏虚兼夹有痰阻血瘀， 其经验方参芪补肺汤具有益气补肺活血化痰的功效，对COPD肺气虚证患者有良 好疗效。 2．MTT检测结果提示：与空白组比较，模型组的ASMCs增殖活性均明显增高， 显著差异(尺0．05)；与模型组相比，中药低剂量组的ASMCs增殖活性无明显差 异(DO．05)，中药高剂量组和氨茶碱组的ASMCs增殖活性明显下降，显著差异 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文(尺0．05)。 贵阳中医学院硕士学位论文 (尺0．05)。 3．免疫组化结果为：与空白组比较，模型组乙酰化组蛋白H4、NF-K Bp65、 PCAN的蛋白表达明显升高，HDAC2的蛋白表达明显降低，均有显著差异(尺O．05)； 与模型组比较，中药低剂量组中HDAC2、乙酰化组蛋白H4、NF．K Bp65以及PCNA 的蛋白表达无显著差异(乃O．05)；中药高剂量组中HDAC2的蛋白表达明显增高， 乙酰化组蛋白H4、NF-K Bp65以及PCNA的蛋白表达明显降低，均有显著差异 (只O．05)；氨茶碱组中I-IDAC2的蛋白表达明显增高，NF_K Bp65、PCNA的蛋白 表达明显降低，均有显著差异(只O．05)，乙酰化组蛋白H4的蛋白表达无显著 变化(乃0．05)。 4．实时荧光定量PCR结果提示：与空白组比较，模型组NF-K Bp65mRNA表达 均明显增高，HDAC2mRNA的表达明显降低，有显著差异(尺O．05)。与模型组比较， 中药低剂量组NF_K Bp65mRNA的表达和I-IDAC2mI州A的表达无明显差异(乃O．05)； 中药高剂量组HDAC2mRNA的表达明显增高，NF_K Bp65mRNA的表达明显降低，有 显著差异(尺0．05)；氨茶碱组I-IDAC2mRNA的表达明显增高，NF—K Bp65mRNA的 表达均明显降低，有显著差异(尺O．05)。 5．Western-blot结果：与空白组比较，模型组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达 和NF_K Bp65的蛋白表达均明显增高，HDAC2的蛋白表达明显降低，均有显著差 异(尺0．05)。与模型组比较，中药低剂量组乙酰化组蛋白H4的蛋白表达、NF_ Bp65的蛋白表达和HDAC2的蛋白表达无明显差异(PO．05)；中药高剂量组 HDAC2的蛋白表达均明显增高，乙酰化组蛋白H4的蛋白表达和NF_K Bp65的蛋 白表达均明显降低，均有显著差异(尺O．05)；氨茶碱组IiDAC2的蛋白表达明显 增高，NF-K Bp65的蛋白表达均明显降低，均有显著差异(只O．05)，乙酰化组 蛋白H4的蛋白表达无显著差异(乃O．05)。 结论： 1．导师注重中医传统，重视益气补肺活血化痰，组方的参芪补肺汤临床疗效 好，实用性强值得推广。 2．通过PCNA及MTT的检测结果证实COPD肺气虚证模型大鼠离体培养的ASMCs 经CSE刺激后存在异常增殖。 3．模型组大鼠ASMCs增殖中乙酰化组蛋白H4和NF-K Bp65的表达增高，HDAC2 2 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文的表达减少，证实了乙酰化组蛋白H4、HDAC2以及NF-K 贵阳