CRL4B协SnailHDAC抑制ECadherin表达促进乳腺癌细胞EMT进程.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 CONTENTSChinese CONTENTS Chinese abstract ． ． 一(1) English abstract ．(6) Abbreviation ．．(12) In仃oduction ． ． ，(13) Part One：CUL4B promotes the EMT progression of breast cancer cells Materials and methods (17) Results ．．(40) Discussion ．(49) Part Two：The molecular mechanism of CUL4B-mediated EMT promotion in breast cancer cells Materials and methods ． ．(52) Resuits ．．(58) Discussion ．． ．．．． ． ．．． (67) Conclusions (69) References ．(70) Acknowledgments (77) Published Papers ．．(79) 万方数据 山东大学硕士学位论文CRL4B 山东大学硕士学位论文 CRL4B协同Snail／HDAC抑制E．cadherin表达，促进乳腺癌细 胞EMT进程 专业：遗传学 硕士生：姜良乾 导师：龚瑶琴教授 中文摘要 乳腺癌是全球范围内常见恶性肿瘤之一，发病率及死亡率高，而导致乳腺癌 患者死亡的主要原因是肿瘤转移。因此迫切需要阐明乳腺癌迁移和浸润机制、发 现新的乳腺癌治疗分子靶点。 CUL4B作为骨架蛋白参与构成CULLIN4B．RING E3泛素连接酶(Cullin 4B—Ring E3 ligase complex，CRL4B)，通过单泛素化修饰底物蛋白或多泛素化修 饰底物蛋白而参与多种生命活动。前期研究表明CUL4B在诸多实体瘤(乳腺癌、 结肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、胰腺癌等)肿瘤组织中高表达，而且可能与肿瘤 转移有关，而上皮间质转化(Epithelial．mesenchymal transition，EMT)是肿瘤转移的 重要机制。因此，本研究利用乳腺癌细胞模型分析了CUL4B在乳腺癌细胞EMT 进程中的作用及其分子机制。 第一部分CUL4B促进乳腺癌细胞EMT进程 本实验室前期实验结果表明CUIAB在乳腺癌中高表达。为明确CUL4B在 乳腺癌细胞迁移及侵袭中的作用，本部分我们首先分析了CUL4B在乳腺癌细胞 EMT进程中的作用，取得了如下结果： 1．CUL4B表达水平与乳腺癌细胞EMT程度呈正相关：我们应用Cellminer NCl60 analysis Tools数据库分析了6种乳腺癌细胞系中CUL4B基因及EMT 1 万方数据 山东大学硕士学位论文相关标记物及转录因子的表达情况，同时用 山东大学硕士学位论文 相关标记物及转录因子的表达情况，同时用WeStem bloRing方法在蛋白水平 进行验证，结果表明CUL4B的mRNA和蛋白表达水平与乳腺癌细胞侵袭能 力及间质细胞标志物及EMT转录因子(TWISTl，ZEBl，ZEB2，FOXC2， CDH2等)表达水平呈正相关，而与上皮细胞标志物(CDHl，KRTl9等)表达 水平呈负相关，提示CUL4B可能促进乳腺癌细胞EMT进程。 2．过表达CUL4B增加正常乳腺上皮细胞EMT促进因子表达，抑制CDHl表达： 利用慢病毒表达系统，我们构建了过表达CUL4B的正常乳腺上皮细胞 MCFl0A及对照稳筛细胞株(MCF 10A CUL4B和MCF 10A Con)，实时定量 PCR和Westem blowing方法检测CUL4B过表达对EMT相关标志物表达水平 的影响。结果显示在MCF 10A细胞中过表达CUL4B导致上皮细胞标志物 CDHl表达下降，EMT转录因子Snail和ZEBl表达升高，说明CUL4B发挥 调控EMT作用。 3．CUL4B促进乳腺癌细胞EMT进程：为进一步证实CUL4B促进EMT进程的 作用，我们利用转移能力较低的乳腺癌细胞系MCF7构建了CUL4B过表达 及对照稳筛细胞株(MCF7 CUL4B和MCF7 Con)和转移能力较高的乳腺癌 细胞系MDA．MB．231构建CUL4B低表达及对照稳筛细胞株(MDA．MB．231 shCUL4B和MDA．MB．231 shNC)。WeStem bloUing方法和实时定量PCR检 测改变CUL4B表达水平对乳腺癌细胞EMT相关标志物和转录因子表达水平 的影响。结果发现，过表达CUL4B显著降低上皮细胞标志物E．cadherin表达， 显著增加间质细胞标志物(如CDH2，VIM)和EMT转录因子(如Snail)表 达水平；而干扰C