IL17对原发性肝癌生物学特性的影响及临意义研究.docx

中文摘要IL-17对原发性肝癌生物学特性的影响 中文摘要 IL-17对原发性肝癌生物学特性的影响 及临床意义研究 中文摘要 原发性肝癌在所有恶性肿瘤中发病率居第五，病死率居第三，其中包括肝细 胞肝癌(hepatocelll_tlar carcinoma，HCC)和肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)。虽然近年来肝癌的临床诊治取得了长足进步，但是由 于其高复发率和高转移率，肝癌患者的长期生存仍令人不满意。当前，转移复发 已成为进一步提高肝癌疗效的瓶颈和关键。临床上迫切需要探索和阐明肝癌转移 复发的分子机制、准确预测患者预后、寻找高效的靶点并设计合理干预治疗的新 方法。 传统的肝癌研究注重肿瘤细胞自身，试图从癌细胞本身基因与表型改变来解 释肿瘤的复发转移。新近的研究越来越关注作为与肿瘤密不可分的局部微环境对 肿瘤演进所起的重要作用。炎症免疫环境作为肿瘤微环境的重要组成，与肿瘤的 发生发展、复发转移都有着密切的关系。由乙型／丙型肝炎病毒感染，或其他非 病毒因素如酒精或肥胖等，导致的肝脏慢性炎症及继发的肝硬化状态是HCC发生 发展的“土壤”。而对于ICC而言，目前众多研究亦表明其是一种与炎症密切相关 的恶性肿瘤，炎症以及相应的免疫应答在其发生和进展中扮演着重要的角色。 THl7细胞是一类与炎症及自身免疫性疾病相关的辅助T细胞。最近研究发现 THl7细胞和它的主要功能性因子IL一17在一些肿瘤中明显升高，但是THl7细胞与 肿瘤免疫之间的关系尚无定论。IL．17对肿瘤的好坏往往取决于肿瘤微环境状态。 裸鼠体内实验发现，转染IL一17后肿瘤细胞生长显著加快；相反，在有免疫力的 鼠体内，IL．17却能够抑制肿瘤生长。临床研究也发现，在前列腺癌、卵巢癌中 THl7细胞亦有利于抑肿瘤。另外，最近报道，环磷酰胺可通过降低Treg细胞、 升高THl7和THl细胞以发挥抗肿瘤作用。但是，在肝癌中却发现肿瘤微环境中 升高的THl7／ILl7与患者的不良预后明显相关。可见，THl7细胞在肿瘤免疫中发 挥的作用取决于机体的免疫背景、肿瘤类型及组织器官微环境等诸多因素。 目前，关于THl7细胞及相关细胞因子在原发性肝癌发生发展过程中作用的 研究处于起步阶段，相关机制尚远未阐明。本研究通过体内外实验，系统性地分 析外源性IL—17对肝细胞肝癌的生长和侵袭转移的影响及相关分子机制。并进一 步通过组织微列阵技术，对HCC和ICC微环境中以IL．17+细胞为主的炎症／免疫 活性细胞的类型、数目、分布、功能状态及相关临床意义等进行细致深入的评估。 中文摘要第一部分IL．17对人肝细胞肝癌生长增殖及侵袭的影响 中文摘要 第一部分IL．17对人肝细胞肝癌生长增殖及侵袭的影响 目的：观察IL．17对人肝癌细胞株Huh7、SMMC7721生长增殖及侵袭的影响。 方法：细胞免疫荧光检测IL．17的受体IL．17R在Huh7、SMMC7721细胞株的定 位及表达情况。荧光定量PCR检测IL一17R在mRNA水平的表达量。MTT 法检测IL．17在不同药物浓度(O，O．1，O．5，1，5，10，50，100 or 500 ng／m1)和 不同作用时间(1～4 d)对Huh7、SMMC7721生长增殖的影响。细胞划痕 和transwell实验观察IL．17(50 ng／m1)对Huh7、SMMC7721侵袭迁移能 力的影响。 结果：Huh7、SMMC7721肝癌细胞均存在IL．17R的表达。不同作用时间、不同 浓度的IL．17对Huh7、SMMC7721细胞的相对增殖率无明显影响Q 0．05)。细胞划痕实验提示IL．17干预组的肝癌细胞较对照组的迁移能力明 显增强。Transwell实验结果提示IL-17干预组的肝癌细胞较对照组的侵袭 能力明显增强(p0．05)。 结论： IL．17对HCC细胞生长增殖无明显促进作用，但可直接通过其受体 IL．1 7RA促进肿瘤侵袭和迁移。 第二部分IL．17促进肝细胞肝癌侵袭、演进的机制研究 目的： 探讨IL．17促HCC侵袭、演进的相关机制。 方法： 应用ELISA法和Western blot方法分别检测外源性IL．17作用于Huh7、 SMMC7721肝癌细胞株后相关炎症因子和信号通路的变化情况。并进一 步采用小干扰RNA(siRNA)技术干扰STAT3和AKT，以及加入外源性 IL一6、IL．6 mAb等，研究IL一17对相关阳性炎症因子和信号转导通路的影 响。Transwell观察在不同作用条件下肝癌细胞侵袭能力的变化。构建IL．17 稳定转染的SMMC7721细胞，种于裸鼠皮下，观测IL．17过表达对肿瘤 细胞生长侵袭的影响以及相关炎症因子、信号通路的变化情况。免疫组化 染色