IL15及mTOR抑制治疗小鼠乳腺癌的实验研究.docx

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 研究目的： 应用mTOR抑制剂(雷帕霉素靶蛋白抑制剂)联合白细胞介素一15(Interle ．ukin．15，IL．15)对小鼠乳腺癌进行治疗研究，观察两种治疗方法联合应用与其 单独作用在控制肿瘤生长、延长患癌动物生存期、延缓肿瘤转移、调节机体免 疫反应及调控肿瘤细胞凋亡等方面的作用，探讨治疗作用的可能机制，为寻找 治疗乳腺癌的新方法提供理论依据。 研究方法： 本实验首先通过脂质体geneporter 3000将IL一1 5表达载体 pHi2．spiL l 5-CMV．TAT(L3)及绿荧光蛋白表达载体pHi2一EGFP—CMV．TAT(L6) 分别转染4T1小鼠乳腺癌细胞，采用倒置荧光显微镜评估细胞转染情况，FCM 分析肿瘤细胞的转染效率及ELISA检测细胞转染后24小时及48小时后上清液 中IL．15的浓度，分析IL一15基因表达情况，以确认CMV启动子正调控IL．15 基因表达质粒载体在转染4T1细胞后IL．15蛋白水平高效表达。 进一步建立小鼠乳腺癌移植瘤模型，分别以小鼠尾静脉注射表达IL．1 5的 L3治疗载体，mTOR抑制剂依维莫司灌胃或联合两种治疗途径进行干预，评估 不同治疗对荷瘤小鼠肿瘤大小、肝脏、肺脏转移情况及生存期的影响；免疫细 胞组织化学法比较各组肿瘤组织ki67、CD4、CD8、NKG2D表达差别：流式细 胞计数对比各组小鼠外周血、脾脏及肝脏CD4+、CD8+T细胞亚群、CD4+CD25+ 调节性T细胞及CDl6+CD32+自然杀伤细胞含量：Tunel法检测肿瘤组织中细胞 凋亡情况。综合各种检测指标及结果评估IL．1 5及mTOR抑制剂对小鼠乳腺癌 的治疗效果及机制。 研究结果： 1．依维莫司治疗组、IL．15治疗组和联合治疗组与对照组相比，肿瘤体积明 显缩小，其差异具有统计学意义(尸0．05)；双重治疗组与单纯依维莫司治疗组 及单纯IL．1 5治疗组相比，肿瘤体积也有所减小，但差异无统计学意义(尸0．05)； 尽管两组治疗方法均能缩小肿瘤体积，但依维莫司治疗组与IL．1 5治疗组之问的 差异不具有统计学意义(P0．05)。 天津医科大学硕士学位论文2．依维莫司连续治疗组较联合用药加依维莫司序贯治疗组在第20天之前 天津医科大学硕士学位论文 2．依维莫司连续治疗组较联合用药加依维莫司序贯治疗组在第20天之前 肿瘤体积稍小，IL一15治疗加依维莫司序贯治疗组较单纯免疫治疗组在第20天 左右肿瘤增长有明显下降趋势，但长期并无明显差别；依维莫司序贯治疗组和 联合用药加依维莫司序贯治疗组肿瘤增长趋势无明显差别；联合用药组和单纯 依维莫司治疗组肿瘤增长趋势无明显差别；联合用药组较单纯免疫治疗组肿瘤 增长稍缓，但长期无明显差别。 3．依维莫司治疗组和IL．15治疗组均能有效地延长荷瘤动物的生存时间， 但其差异与对照组相比无统计学意义(尸0．05)，且两治疗组之间的差异也不具 有统计学意义(P0．05)；而双重治疗组虽较对照组而言可延长造模动物生存率， 但与单纯依维莫司和IL．15治疗组相比，却相对缩短造模动物生存率，而差异并 无统计学意义(尸0．05)。 4．IL．15治疗组，肿瘤组织中CD4、NKG2D表达较对照组及依维莫司治疗 组升高，CD8的表达较依维莫司治疗组显著增加，Ki一67表达较对照组显著降低， 且差异具有统计学意义(尸0．05)；依维莫司治疗组，肿瘤组织中CD4、CD8、 NKG2D的表达均较对照组及IL一15治疗组降低，且差异具有统计学意义(尸 0．05)； Ki一67的表达较对照组显著降低，差异具有统计学意义(尸0．05)，而 较IL一1 5治疗组稍低，但差异并不具统计学意义(尸O．05)；双重治疗组CD4 表达较对照组及依维莫司治疗组增加，CD8表达较对照组及IL．15治疗组降低， Ki．67较对照组明显降低，NKG2D表达较对照组及依维莫司治疗组增加，而较 IL．15治疗组降低，差异均具有统计学意义(尸0．05)。 5．IL．15能显著提升CDl6+细胞比例，与其余两组比较差异具有统计学意义 (P0．05)，能提升CD4+及CD8+T细胞比例，能降低CD25+调节T细胞比例， 但与对照组及依维莫司治疗组相比，差异无统计学意义(P0．05)；而依维莫司 虽能降低CD4+、CD8+及CDl6+细胞比例，增加CD25+细胞比例，但与对照组相 比，差异均无统计学意义(P0．05)。 6．IL一1 5能显著提升小鼠脾淋巴细胞中CD4+及CD8+T细胞比例，降低CD25+ 调节T细胞比例，与对照组及依维莫司治疗组相比，差异具有统计学意义(尸 0．05)；依维莫司能降低CD4+、CD8+、CDl6十细胞比例，增加CD2