Klebsiella oxytoca XCH1菌的筛选及胞外多糖的研究.docx

Klebsiella oxytoca XCH一1菌的筛选及其胞外多糖的研究 K／ebsieIla oxytoca XCH-I菌的筛选及其胞外多糖的研究 摘 要 本文所研究的产酸克雷伯式菌(Klebsiella oxytoca XCH．1)是从青岛海藻化工 厂海带浸泡液中筛。该菌在其生长过程中产生大量粘性的胞外多糖，为了进～步 开发利用Klebsiella oxytoca XCH一1胞外多糖，本文对Klebsiella oxytoca XCH．1胞 外多糖做了比较详细的研究。包括发酵，理化特性，结构及生物活性等。 本文采用发酵法制备Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多糖。Klebsiella oxytoca XCH-1菌发酵产生胞外多糖受多种因素的影响，如通气量、培养基的起始pH以及 培养基的营养成分。实验结果表明，对于Klebsiella oxytoca XCH-1菌产胞外多糖 的发酵。甘露醇为最佳碳源，硫酸铵为最佳氮源。采用均匀设计方法对发酵条件 进行了研究，结论为甘露醇初始浓度为1％，C：N为50：l，温度为23。C，初始 pH为8．18，接种量为9％。KlebsiellaoxytocaXCH一1胞外多糖的产量为5．93mg／g。 首先发酵Klebsiella oxytoca XCH．1，并用乙醇沉淀的方法得到Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多糖粗品，利用Q-Sepharose FF阴离子交换树脂进行分级纯 化，得到主要组分，并对其理化性质进行了全面的分析。Klebsiella oxytoca XCH．1 胞外多糖为白色粉末，溶于水，并可溶于酸性、碱性溶液中。不溶于有机溶剂。 Klebsiella oxytoca XCH—l胞外多糖的水溶液呈半透明粘稠状。用Sephaeryl S-300 HR撮胶过滤色谱法测得分子量为156000左右。Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多 糖中硫酸基、蛋白质的含量为零。总糖含量为66．45％，糖醛酸含为15．89％。以 0．1mol／L NaCI为溶剂配制0．5％的Klebsiella oxytoca XCH．1胞外多糖溶液，特性 粘度为6．77。 Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多糖具有较高的粘度，对热具有相当大的稳定 性，短时间内，耐受100 4C高温。pH 4--8范围内。相对粘度基本不变。电解质对 胞外多糖的相对粘度有一定的影响，随着NaCI、CaCl2、Na28407浓度加大，相对 粘度逐渐降低，当NaCI、CaCl2、Na28407的浓度分别达到并超过3％、】％、1．5  Klebsiella ox),toca XCH—I菌的筛选欲其胞外多糖的研究 ％时，Klebsiella oxytoca XCH一1胞外多糖溶液的相对粘度基本保持不变，表现出 一定的抗盐性。 本文研究了Klebsiella oxytoca XCH一1胞外多糖对Pb(II)、Cd(II)、Cr(VI)、 Fc(III)的脱除能力。探讨了反应时间、重金属溶液浓度、溶液的pH值等因素对 Klebsiella oxytoca XCH．1胞外多糖脱除重金属能力的影响。结果表明Klebsiella oxytoca XCH·1胞外多糖对以上几种重金属离子有良好的脱除作用。Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多糖吸附重金属离子的能力顺序为Fe(III)Pb(II)Cd(II) Cr(VI)。强酸性条件不利于Klebsiella oxytocaXCH．1胞外多糖对重金属离子的 吸附，在弱酸性或接近中性时有利于吸附。 根据《食品安全性毒理学评价程序和方法》中急性经1：3毒性(LD50)分级标 准，通过小鼠急性经口毒性实验确定Klebsiella oxytoca XCH．1胞外多糖和磺化 Klebsiella oxytoca XCH—l胞外多糖可能为实际无毒物质。 本文将Klebsiella oxytoca XCH-l胞外多糖进行化学修饰。得到磺化Klebsiella oxytoca XCH·l胞外多糖，并用红外光谱验证了一OS03一取代的情况。对磺化 Klebsiella oxytoca XCH．1胞外多糖的抗凝血活性进行了研究。实验表明，磺化 Klebsiella oxytoca XCH-1胞外多糖具有一定的抗凝血活性。 利用MTT法进行了淋巴细胞毒性实验、用ELISA法测定了IFN一扎IL--2、 IL--10、IL--12含量，实验表明Klebsiella oxytoca XCH．1胞外多糖及水解后的 Klebsiella oxytoca XCH-l胞外多糖均有明显的免疫增强活性。有促进T、B细胞的 增殖反应，虽然对T细胞