GADA IA2A微量平放射结合检测法的建立与临床应用.docx

硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 RLA法比较，评价方法的一致性。 4．临床应用检钡tJ224例正常人GADA和IA-2A浓度，确定阳性 阈值。并检测162例T1DM和210例新诊T2DM患者GADA和IA．2A浓 度，评估临床应用效果。 5．末梢血检测’对35例T1DM患者、24例T2DM患者和32侈K]正 常人同时采集静脉血和手指血，比较检测结果的一致性。 6．成本分析对微量平板RBA法与经典RLA法检测成本进行 比较。 结果： 1．优化的检测条件包括采用Sephadex G．25柱凝胶过滤层析法 纯化标记抗原，犁l血清与放射性计数为3 X 104标记抗原缓慢振荡孵育 24h，采用4℃PBS缓冲液洗涤沉淀物10次，以及采用Optiphase Supermix型闪烁液进行放射性计数。 2．该法检测GADA批内Cy为3．8％～10．2％，批间CV 5．6％～ 11．9％。检测认．2A批内C助4．1％10．O％，批间CV 5．7％--12．8％． 间隔1月的3次重复检测，GADA和IA．2A浓度差异无显著性(P均 O．05)，所测标本阴、阳性结果判断完全一致；WHO标准品浓度在 15．63-250 IU／血范围内，血清样品GADA在40．3～664 IU／锄，IA-2A茬E 53～848 IU／皿范围内线性良好。G心气检测限为3．6 IU／砌，IA．2A检测 限为0．54 IIjI／ml；该法检测Q蛐A回收率为71．9％．122．8％，IA-2A回收 率为72．O％～133．3％；DASP 2005结果显示，检测@锄A灵敏度为78％， 特异性为98％。检测认．2A灵敏度为72％，特异性为98％；血清标本 TG浓度≤5．8mmol／L，TBII_脓度≤67．1pmol／L，血浆中Hb浓度≤5．39／L 下，对GADA和IA-2A检测结果无显著影响；交叉反应显示，50例 Graves病患者中GADA阳性2例，12例系统性红斑狼疮患者GADA阳性 1例，20例类风湿因子阳性的风湿性关节炎患者qbGADA阳性1例。 IA-2A在上述3种自身免疫性疾病中均未检测出阳性；微量平板RBA II 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 检测GADA与经典RLA法结果判定一致率97．5％，Kappa值0．95；检测 IA-2A与经典RLA法结果判定一致率96．5％，Kappa值0．92。 3．该法检测GADA和IA．2A阳性阈值分别为40．0 IU／111l和9．2 IU／ml(均为224例正常人的99％百分位点)；检测T1DM患者GADA阳 性率为46．9％，明显高于正常人的0．89％(PO．001)口检测T1DM患 者IA-2A阳性率22．8％，也明显高于正常人的O．89％(PO．001)；检测 T2DM患者GADA阳性率为5．2％，显著高于正常人的0．89％(P0．01)。 而IA-2A在T2DM患者中阳性率2．4％，与正常人相比，差异无显著性 (PO．05)。 4．微量平板RBA法检测手指血GADA与经典RLA法检测静脉血 结果判定一致率96．7％，Kappa值0．905。检测IA．2A结果判定一致率 100％；微量平板RBA法检测手指血与静脉血GADA．；}IIA-2A结果判定 一致率均为100％。 5．微量平板RBA法检测单例抗体标本试剂成本为34．73元，较经 典RLA法节约了成本19．69元。 结论： 建立的微量平板RB则去灵敏度、特异性、重复性好，与经典RLA 法一致性高，临床初步应用效果良好，能适用于末梢血的检测，易于 自动化且降低检测成本，具有较好的临床应用价值。 关键词：谷氨酸脱羧酶抗体，蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体，1型 糖尿病，2型糖尿病，放射结合检测法，硫放射性同位素；同位素标 记 l／I 硕士学位堡奎 硕士学位堡奎 茎奎垫墨 ABSTRACT Background： Several islet autoantibodies have been found in sera of type 1 diabetes mellitus(T1DM)patients and pre-T1DM individuals．Detection of