LTETF大鼠睾丸生精细胞BclxL和Fas蛋白变化及罗格列酮的预效果.docx

天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种慢性终身性疾病，随着人们平均寿命 的延长，生活水平的提高及饮食结构的变化，糖尿病的患病率不断增加。糖尿 病已成为继肿瘤、心血管之后的第三大严重威胁人类健康的慢性非传染性疾病。 生殖系统功能障碍是糖尿病并发症之一，其发病率是非糖尿病病人的5-10倍， 给患者的身心健康带来了严重的压力和困扰，近年来越来越受到重视。糖尿病生 殖系统功能障碍主要包括勃起功能障碍(erectiledysfunction，ED)及男性不育等。 OLETF鼠是一种自发性2型糖尿病大鼠，本实验以OLETF鼠作为2型糖 尿病模型，以LETO鼠和摄入罗格列酮的OLETF鼠作为其对照，通过观察睾丸 微观病理变化和生精细胞凋亡情况及附睾中精子的受精力，并运用免疫组化方 法对各级生精细胞与凋亡相关的Bcl．xL和Fas蛋白表达情况进行检测，来探讨 糖尿病生殖系统功能障碍的发生机制和罗格列酮的干预情况。 方法 大鼠在无特定病原体级(SPF级)条件下单笼饲养，饲以标准饲料，12／12h光 照黑暗循环，自由获取食物和饮水。定期行口服葡萄糖耐量试验(ocyr)监测血 糖，血糖峰值16．7 mmol／L和负荷后120 rain血糖11-1 mmol／L诊为糖尿病，只 具备上述l条为糖耐量减低。至30周时，共有成模OLETF大鼠12只，随机分 为糖尿病对照(DM)组和罗格列酮(RGZ)组(每组6只)，8只LETO鼠为正常对照 (NC)组。罗格列酮以蒸馏水溶解稀释后为RGZ组大鼠灌胃给药，剂量为 3mg／kg·d。DM组与NC组以等量蒸馏水灌胃，各组均每日灌胃1次，至12周。 12周后称重大鼠体重，然后脱臼处死大鼠，下腹正中切开腹壁，取出大鼠睾丸， 用冷生理盐水冲洗，滤纸拭干，准确称重。然后置于10％中性福尔马林溶液中 固定，常规石蜡包埋切片，HE染色。光镜下观察组织结构的改变，并测量有关 形态学指标。吖啶橙荧光染色评价附睾中精子的受精能力。ISEL原位末端切口 平移法检测生精细胞的凋亡。Bcl．xL的测定应用SABC(strept avidin-biotin complex)法，以胞浆或(和)胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性表达，以PBS代替一 抗作为阴性对照。 Fas蛋白表达变化检测按照SP法进行。图像用Motic Images Advanced3．2版图像分析软件进行分析。 。  天津医科大学硕士学位论文 结果 1．造模情况：OLETF大鼠较LETO大鼠明显肥胖、多饮、多食、多尿，与 糖尿病临床表现相似。 2．睾丸大体形态及称重：肉眼观察，模型组睾丸有明显的萎缩现象，严重 者睾丸塌瘪松软，颜色暗红，纹理不清，少数睾丸白膜破裂。罗格列酮组睾丸 与模型组睾丸肉眼观察变化不大。睾丸重量变化，与模型组比较，对照组睾丸 重量大于模型组，罗格列酮组睾丸重量和模型组差别无统计学意义。 3．睾丸组织HE染色后镜下观察：模型组睾丸组织较对照组有明显的病理 变化。罗格列酮组生精小管间距增宽，生精细胞排列紊乱，管腔内精子少见。与 对照组相比，模型组精原细胞和间质细胞计数降低；罗格列酮组与模型组相比， 并无统计学差异。 4．睾丸生精细胞凋亡变化：与糖尿病组相比，对照组睾丸凋亡的生精细胞 数少于糖尿病组，而罗格列酮组与糖尿病组并无统计学差异。 5．生精细胞Bcl．xL蛋白表达变化：与模型组相比，对照组生精细胞Bcl．xL 蛋白阳性表达平均灰度值降低，罗格列酮组生精细胞Bcl．xL蛋白阳性表达平均 灰度值与模型组无统计学差异。 6．生精细胞F舔表达变化：F弱蛋白在对照组以弱阳性表达为主，在模型组 以强阳性表达为主，在罗格列酮组以中度阳性表达为主。 结论 1．OLETF大鼠表现与糖尿病相似，可作为研究2型糖尿病的理想动物模型。 2．OLETF大鼠睾丸明显萎缩，甚至塌陷。睾丸系数减小。光镜下病理改变明显， 表现为生精小管数量减少，萎缩扭曲变形，基膜有破损，生精细胞数量减少， 问质结缔组织增生，而间质细胞减少。 3．OLETF大鼠睾丸生精细胞凋亡增多，附睾中精子的受精能力减弱。说明凋亡 机制可能参与了2型糖尿病生精障碍的过程。 4．罗格列酮虽然可降低2型糖尿病的血糖，但对2型糖尿病引起的生精障碍并 无改善作用。 关键词：2型糖尿病睾丸罗格列酮OLETF鼠Bcl．xL F邪蛋白  天津医科大学硕士学位论文 Abstract objeetive Diabetes(diabetes mellitus，DM)is one kind of chronic lifelong disease．Along with the people life expectancy extension，living standar