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miR-146a调控Toll like receptor4信号通路肠缺血及缺血再灌注损伤中的作用及机制研究
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四删医叠太堂亟±堂僮i金塞
目 录
1 miR一1 46a调控Toll like receptor 4信号通路在肠缺血及缺血再 灌注损伤中的作用及机制研究 1
1.1 中文摘要 1
1.2 英文摘要 4
1.3 前言 8
1.4 材料与方法 13
1.5 结果 33
1.6 讨论 48
1.7 结论 66
1.8 参考文献 67
1.9 英汉缩略词对照表 75
2 致谢 77
3 Toll样受体4与肠缺血再灌注损伤关系研究进展(综述)
4 攻读硕士期间发表的论文 96
万方数据
miR-1
miR-1 46a调控T01l like receptor 4信号通路在肠缺血 及缺血再灌注损伤中的作用及机制研究
摘要
目的:在体外模拟肠缺血及缺血再灌注,探讨miR.146a及 TLR4.TRAF6-NF.心通路在其中的作用情况,为肠缺血的早期诊断及 缺血相关性损伤之治疗提供理论基础。方法:利用大鼠肠上皮细胞 (intestinal epithelial cell,IEC.6),分别以1h、2h、3h建立不同时间 缺血模型(Ilh、12h、13h),以缺血1h再灌注1h建立缺血再灌注模型 (11l汛1h),再在Ilh组及IlhRlh组中调控miR-146a的表达,利用实时 定量PCR检测各组miR.146a、TLR4、TRAF6、RIP、XIAP的mRNA 表达水平,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western.Blot检测HIF.1a、 TLR4、TRAF6、RIP、XIAP、SCOS一3、NF-r.B、cleaved-Caspase一3 蛋白表达。实验数据采用SPSS 1 3.0统计软件进行统计分析,两样本
均数比较采用t检验,多样本均数多重比较采用单因素方差分析,氏
O.05为差异有统计学意义。结果:(1)HIF.1a在缺血时表达显著增加 伙0.01),再灌注处理后其表达下调,迅速趋于正常水平。(2)肠缺 血患者血浆中,miR.146a的表达显著下降(尸0.01)。(3)缺血lh后
miR-146a的表达显著降低(尸O.01),以后随着缺血时间的延长而缓 慢恢复,但始终低于正常;IlhRlh组的miR.146a水平高于Ilh组(尸 0.05),但仍显著低于正常(P0.05)。(4)细胞在缺血lh、2h、3h情况
下的凋亡率会随着缺血时间的延长而逐渐升高,但缺血2h时与缺血3h
时比较无统计学意义;IlhRlh组的凋亡率较Ilh组更高(氏O.05)。(5)
万方数据
在TLR4、TRAF6、RIP的mRNA水平与TLR4、TRAF6、RIP、NF.1出、
在TLR4、TRAF6、RIP的mRNA水平与TLR4、TRAF6、RIP、NF.1出、 cleaved.Caspase.3的蛋白水平中,具有相似的变化趋势,都是在缺血
及缺血再灌注中显著升高(氏O.05),其中在缺血1h时升高得最明显
(尸0.01),以后随着缺血时间的延长及再灌注的发生较在Ilh组的基 础上有所下降,但始终高于正常(尸O.05);XIAP的mRNA水平与 SCOS.3、XIAP的蛋白水平变化中,都是在缺血1h时显著下降(氏0.01), 以后随着缺血时间的延长或再灌注的发生略有恢复,但始终低于正常
(尸O.05)。(6)在正常对照组中给予miR.146a的mimic或inhibitor处 理后,可显著上调或下调miR.146a的表达(尸O.01),但对细胞凋亡 率无明显改变,无统计学意义。(7)在Ilh组中,用miR.146a的mimic
处理后,miR-146a的水平显著升高职O.01);而用miR.146a的inhibitor
处理过后,miR.146a下降趋势不明显,无统计学意义。(8)在IlhRlh 组中,给予miR.146a的mimic或inhibitor处理后,可显著上调或下调
miR-146a的表达水平(代0.05)。(9)在Ilh组及IlhRlh组中,用
miR.146a的mimic处理,显著上调miR.146a的表达水平后,TLR4、 TRAF6、RIP、NF.r.B、cleaved.Caspase.3的上调被抑制,而SOCS.3 及XIAP的上调被促进,各自与单纯Ilh组、IlhRlh组比较具有明显差 异(尸O.05),细胞凋亡率下降,说明miR.146a抑制细胞凋亡起保护 作用。(10)在IlhRlh组中,用miR.146a的inhibitor处理,下调miR.146a 的表达水平后,TLR4、TRAF6、RIP、NF.r.B、cleaved.Caspase.3表
达上调,而SOCS.3及XIAP表达下调,与单纯IlhRlh组相比具有明显 差异(尸O.05),细胞凋亡率增加,说明抑NmiR.146a过
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