miR2243p靶向调控岩藻糖基转移酶UT4在乳腺癌多耐药中的研究.docx

目 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 5 (一)前言(一)日U舌 55 (二)材料和方法 6 1．实验材料 6 1．1实验对象 6 1．2主要试剂 6 1．3主要仪器 7 2．实验方法 8 2．1细胞培养 8 2．2 RNA提取和Real．time PCR 8 2．3膜蛋白提取 9 2．4质谱分析 9 2．5免疫印迹分析 10 2．6 FUT4的干扰、过表达 10 2．7 miR．224-3p的干扰、过表达 10 2．8体外药敏分析 11 2．9体内肿瘤对抗瘤药物的敏感性分析 11 万方数据 2．10免疫组化分析 2．10免疫组化分析 12 2．11 双荧光素酶报告实验 lI oI 6 12 2．12统计分析 13 (三)结果 13 1．质谱分析T47D和T47D／ADR细胞表面糖链的组成 13 2．FUTs家族在两对乳腺癌亲本细胞株及耐药细胞株中的 差异表达 15 3．特异性下调FUT4的表达对乳腺癌细胞体内外药敏性的 影响 1 6 4。过表达FUT4对乳腺癌细胞体内外药敏性的影响 17 5．miR．224．3p靶向调节FUT4的表达 18 6．miR．224．3p靶向调控FUT4对乳腺癌细胞体内外药敏性的 影响 20 (四)讨论 21 (五)结论 24 (六)参考文献 25 三、综述 29 (一)综述 29 (二)参考文献 32 四、攻读学位期间发表文章情况 35 五、致谢 36 万方数据 大连医科大学硕士学位论文miR一224-3p靶向调控岩藻糖基转移酶FUT4 大连医科大学硕士学位论文 miR一224-3p靶向调控岩藻糖基转移酶FUT4 在乳腺癌多药耐药中的研究 硕士生姓名：冯晓斌 指导教师：贾 莉 教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 目的：通过研究岩藻糖基转移酶家族(FUTs)在人乳腺癌细胞株及其耐药细 胞株中的差异表达，阐明基于miR一224．3p为探针调控岩藻糖基化在乳腺癌多药耐 药性的功能机制，继而为治疗乳腺癌提供新的策略。 方法： (1)通过质谱仪检测T47D(人乳腺癌细胞株)及其T47D／ADR(人乳腺癌耐 阿霉素细胞株)细胞表面N一糖链的组成。 (2)通过real—time PCR技术筛选出入乳腺癌细胞株及其耐药细胞株中差异表 达3倍以上的FUT基因。 (3)特异性下调T47D／ADR中的FUT4、上调T47D中FUT4，检测下调及上 调前后T47D／ADR、T47D细胞在体内、体外对药物敏感性的变化。 (4)采用双荧光素酶实验验证miR．224．3p与FUT4的靶向关系：特异性下调 T47D中的miR一224．3p、上调T47D／ADR中的miR-224-3p，检测干扰、过表达前 后T47D／ADR、T47D细胞中FUT4的表达情况，以及在体内、外对药物敏感性的 变化。 结果： (1)T47D和T47D／ADR细胞膜上N一糖链的组成具有明显差异。 (2)FUT4基因在人乳腺癌细胞株及其耐药细胞株中的表达差异最为明显。 (3)特异性下调T47D／ADR细胞中FUT4表达，该细胞的药物敏感性增强；特 异性上调T47D细胞中FUT4表达，该细胞的药物敏感性减弱。 (4)特异性下调T47D细胞中miR．224．3p，FUT4表达增加；特异性上调 万方数据 大连医科大学硕士学位论文T47D／ADR细胞中miR一224—3p，FUT4表达减弱，该细胞的药物敏感性增强。 大连医科大学硕士学位论文 T47D／ADR细胞中miR一224—3p，FUT4表达减弱，该细胞的药物敏感性增强。 结论： (1)FUT4在人乳腺癌细胞株T47D及其耐药细胞株T47D／ADR中的表达具有 显著差异，这种差异与乳腺癌的多药耐药具有相关性。 (2)miR．224—3p在人乳腺癌细胞株T47D及其耐药细胞株T47D／ADR中的表达 具有显著差异，这种差异与乳腺癌的多药耐药具有相关性。 (3)miR．224．3可能是通过靶向负调控FUT4的表达而调控乳腺癌细胞的多药 耐药。 关键词：乳腺癌多药耐药岩藻糖基转移酶miR-224．3p 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Increased 大连医科大学硕士学位论文 Increased fucosyiafion has a pivotal role in multidrug resistance of breast cancer cells through miR-224—3p targeting FUT4 Master degree candidate：Feng Xiaobin Supervisor Professor：Jia li Professior Major：Diagnostics of clinical laboratory Abstr