Mir33a在调控乳腺癌细胞增殖和转中的功能.docx

厦瞅靴论文著作蝴声明l㈣掣本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》 厦瞅靴论文著作蝴声明l㈣掣 本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》 等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送交学位 论文(包括纸质版和电子版)，允许学位论文进入厦门大学图书馆及 其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国博士、 硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文的标题和摘要汇 编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。 本学位论文属于： ( )1．经厦门大学必威体育官网网址委员会审查核定的必威体育官网网址学位论文， 于 年 月 日解密，解密后适用上述授权。 ( )2．不必威体育官网网址，适用上述授权。 (请在以上相应括号内打“√”或填上相应内容。必威体育官网网址学位论文 应是已经厦门大学必威体育官网网址委员会审定过的学位论文，未经厦门大学必威体育官网网址 委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的，默认 为公开学位论文，均适用上述授权。) 声明人(签名)：彩象白组 年 月 日 万方数据 摘要摘要 摘要 摘要 背景：微小RNA(microRNA)是一类长度在19—23个碱基、非编码功能的小 RNA，在许多生物中都有表达。pri-miRNA在细胞内，经过胞核和胞质中一系列的 加工修饰后形成成熟的miRNA。成熟microRNA能够通过与靶基因3’UTR区结合 形成近完全或不完全的配对，导致靶基因mRNA降解，从而调控靶基因的表达。随 着生物测序技术的发展，目前在人体中己发现2500多个人源miRNA．研究证明 miRNA在多种恶性肿瘤生物学功能中起着重要作用。比如：乳腺癌、胃癌、结肠 癌、肝癌和肺癌等。乳腺癌是弓l起成年女性死亡最常见的肿瘤之一，已发现有多 种miRNA的表达异常。mit爸NA通过调控靶基因影响肿瘤的发生发展是目前的研究 热点之一。 目的：研究miR-33a在乳腺癌中的生物学功能，寻找miR-33a在乳腺癌细胞 中作用的下游靶基因，并探究其作用的机制。 方法：(1)通过荧光定量PCR和原位杂交的方法检测miR-33a在23例乳腺癌 病理组织样品中的表达情况，又通过荧光定量PCR检测了miR一33a在乳腺上皮细 胞和乳腺癌细胞株中的表达情况。(2)构建高表达miR-33a的重组质粒载体，通 慢病毒转染和筛选获得稳定高表达miR-33a的乳腺癌细胞，荧光定量PCR检测其 表达情况。(3)通过体外的MTT实验、平板克隆、Transwell等实验来验证过表 达miR一33a对乳腺癌细胞生物功能的影响。同时从反面通过敲低miR一33a来验证 miR-33a对乳腺癌细胞生物功能的影响。(4)体内实验通过裸鼠皮下成瘤、尾静 脉注射定向肺转移等体内实验来验证过表达miR-33a对乳腺癌细胞成瘤能力和 远处转移的影响。(5)在寻找靶基因实验中，结合数据库的预测结果，挑选可能 的靶基因，首先通过荧光定量PCR检测这些目的基因在过表达miR-33a的乳腺癌 细胞和对照组细胞中的表达情况，挑选其中明显受到过表达miR一33a影响的靶基 因，然后通过敲低miR-33a的细胞系进一步验证靶基因，然后进行荧光素酶报告 基因实验验证和Western Blot验证，寻找出miR-33a在乳腺癌中的直接靶基因。 结果：(1)荧光定量PCR和原位杂交结果显示miR一33a在乳腺癌病理组织样 品中明显低表达，在高转移乳腺癌细胞株中表达量最低。(2)MTT和平板克隆实 万方数据 摘要验表明在MDA-MB-231细胞株中过表达miR-33a能够明显抑制细胞的增值能力， 摘要 验表明在MDA-MB-231细胞株中过表达miR-33a能够明显抑制细胞的增值能力， 在敲低miR一33a的MCF一7乳腺癌细胞株中，MCF-7细胞株的增殖能力与对照组相 比明显增强。(3)Transwell实验表明在MDA—MB一231细胞株中过表达miR一33a 能够明显抑制细胞的迁移和侵袭能力，在敲低miR一33a的MCF一7乳腺癌细胞株中， MCF-7细胞株的迁移和侵袭能力与对照组相比明显增强。(4)小鼠皮下成瘤实验 和尾静脉肺定向转移实验，证明过表达miR一33a可以明显抑制乳腺癌增殖和远处 转移，低表达miR-33a可以促进乳腺癌的增殖和远处转移。(5)荧光定量PCR 结果表明。在过表达和低表达miR-33a的乳腺癌细胞株中，ADAM9，ROSl，SOX9 和EGR3基因的表达受到明显影响，然后在通过荧光素酶报告基因实验，过表达 miR-33a能够明显抑制ADAM9和ROSl基因的荧光素酶活性，最后的Western Blot， ADAM9和ROSl在过表达miR-33a的乳腺癌细胞中，蛋白表达明显受到抑制。 结论：MiR-33a在乳腺癌细胞中低表达，miR-