Gufalin通过ERKRSK2通路对ECA109胞和裸鼠移植瘤作用的研究.docx

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 研究生签名：理鹊导师签章：却闱[筝二级学廊蔷尊甍亨毫．一j I ’褂，、掣誓粤湖 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：理鹄 翩擗彳呼 年 月√日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 5 英文缩写 11 研究论文 Bufalin 过ERK／RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作 用的研究 前言再U舌 ．12·lz 材料与方法 ．13 结果 28 附图 32 附表 47 讨论 55 结论 57 参考文献 58 综述RSK2与肿瘤的研究进展 62 致谢 70 个人简历 71 万方数据 中文摘要Bufalin通过ERK／RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作用 中文摘要 Bufalin通过ERK／RSK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤作用 的研究 摘 要 食管癌是人类常见的消化道肿瘤，其发病率居世界恶性肿瘤的第8 位，死亡率居第6位。我国位于食管癌高发地区，男性发病率高于女性， 平均死亡年龄63岁。随着分子生物学研究的不断深入，发现食管癌的发 生、发展是一个多基因、多因素、多阶段的进行性过程。近年来信号转导 通路及抗肿瘤药物的作用机制成为研究重点，为临床治疗食管癌提供了方 向。 P90核糖体S6激酶2(Ribosomal S6 kinase 2，RSK2)是p90RSK蛋 白家族的成员，同时也是细胞外调节激酶1／2 (extracellular signal-regulated protein kinases 1 and 2，ERKl／2)下游重要的一级效应分 子。活化的RSK2通过调节与增殖相关的糖原合成激酶3(Glycogen synthase kinase 3B，GSK31])、促凋亡蛋白BAD、与细胞迁移和侵袭相关 的肌动蛋白Fascin．1等下游靶分子影响细胞的增殖、凋亡、侵袭与迁移。 Bufalin(蟾蜍灵)是我国传统中药蟾酥中的主要成分，属强心甙类物 质，其分子式为C2。H3404，相对分子量为386．5。我们前期研究结果表明 bufalin可以在体外抑制ERK的磷酸化，为进一步探讨其在体内的作用及 对下游通路的影响，本实验以食管癌ECAl09细胞为研究对象，并通过将 ECAl09细胞接种于裸鼠，建立食管鳞状细胞癌移植瘤，探讨bufalin通过 ERK／RSK2通路对食管癌细胞及裸鼠移植瘤的影响。 目的：探讨Bufalin通过ERK／I{SK2通路对ECAl09细胞和裸鼠移植瘤 作用的研究。 方法： 1使用CCK．8检测bufalin作用ECAl09细胞不同浓度及时间的增殖 抑制率。 2使用TUNEL标记法检测不同浓度的bufalin干预ECAl09细胞各 组的凋亡指数。 3使用划痕实验研究不同浓度bufalin对食管癌细胞迁移的影响；在 万方数据 中文摘要此基础之上，利用Transwell小室实验检测bufalin对食管癌细胞侵袭与 中文摘要 此基础之上，利用Transwell小室实验检测bufalin对食管癌细胞侵袭与 迁移的影响。 4建立裸鼠食管癌细胞移植瘤模型，观察模型组、bufalin低剂量组 (BL，0．5mg／kg)、bufalin中剂量组(BM，1．0mg／kg)、bufalin高剂量 组(BH，1．5mg／kg)、PD98059组(3．0mg／kg)、联合组(BP’bufalin+PD98059) 裸鼠的体重来评价bufalin对裸鼠食管癌移植瘤的影响，并通过测量原位 瘤的体积来检测bufalin的抑瘤作用。 5显微镜下观察各组的移植瘤组织学表现，TUNEL标记法检测裸鼠 移植瘤的凋亡指数。 6实时定量PCR法检测裸鼠移植瘤中ERK及RSK2的mRNA的表 达。 7 Westem blot方法及免疫组织化学方法检测裸鼠移植瘤中ERKl／2、 RSK2、通路下游靶分子GsI(3 13、BAD蛋白表达及其磷酸化和Fascin．1 的蛋白表达。 结果： l CCK．8结果显示以不同浓度bufalin(20、40、60、80、100 nmol／L) 干