MiRN1269a单核苷酸多态性对肝癌易感性的影响-内科学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 研究背景及目的： 基于早期肝癌患者缺乏特异症状和体征，而中晚期肝癌患者治疗效率又比较 低并且预后较差，探讨肝癌的早期诊断与其发生机制具有重要意义。miRNA是 一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动 植物中参与转录后基因表达调控，其形成过程从长链pri．miRNAs到pre．miRNAs， 最后形成成熟miRNAs，可直接结合到mRNA的3’UTR，从而抑制mRNA的翻 译，导致mRNA的降解，进而影响蛋白质的表达，改变生物过程。SNP是指基 因组内单个核苷酸改变时发生DNA序列的多态性变化，SNP决定着群体和个体 基因序列的细微差别，是人类基因组最常见的一种变异类型。本研究旨在研究 miRNAl269a及miRNAl269a SNP与肝癌发生易感性的关系及其差异和对肝癌 细胞增殖、凋亡等生物学特性的影响，验证miRNA与其直接作用靶基因之间的 关系及其靶基因对肝癌细胞的生物学作用，进而阐明miRNAl269a及 miRNAl269a SNP是对肝癌细胞产生以上生物学影响的具体作用机制。 方法： 根据已有的前体和成熟miRNA的SNP数据库，筛选出可能对靶基因结合或 miRNA表达量有影响的功能位点，使用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱 分析技术在723例肝癌个体和698例健康对照的血液样本基因组DNA中进行 SNP分型，分析这些位点的基因频率在病例组和对照组之间的差异，获得与肝癌 有关联的位点。 此外，对该关联性研究所示的miRNA SNP阳性位点进一步进行其功能性研 究，首先在肝癌患者血浆中通过提取与肝癌易感性相关的阳性miRNA，来确定 其表达量与miRNA SNP的关系。再进一步通过TargetScan 6．2，miRDB， miRWALK数据库来预测此miRNA SNP的可能靶基因，利用靶基因的显著性功 能分析GO．Analysis，靶基因的显著性信号通路分析Pathway—analysis，最后与 Cosmic数据库肿瘤相关的癌基因取交集，得到8个靶基因，然后通过miRNA SNP 转染的细胞来验证。最后得到两个预测靶基因． 万方数据 中文摘要 中文摘要 结果： 从人类miRNA SNP数据库中共筛选出13个miRNA的SNP位点，发现 miRNAl269aqbrGA)与肝癌发生风险之间的关联具有统计学意义。与 野生型GG基因型相比，AA基因型明显提高了肝癌发生的风险 (P=4．32x104,0R(95％CI)=2．10(1．47．3．0))，而GA基因型也具有同样的结果 (P=5．68x10q3,OR(95％CI)=2．65(2．04．3．46))，而这一效应也同时在r 显性模型中(dominant model GG VS GA+AA)中显现出来(P=I．28x10。12， OR(95％CI)=2．52(1．95．3．25))，揭示出含有A基因型可以明显提高肝癌易感性 (P=1．28x10‘12)，同理可以看出miRNAl269a的rGA)位点的基因型与 肝癌和乙肝相关性肝癌易感性具有相关性，该位点的等位基因型A可增加肝癌发 生的风险性，是风险性因子(P=6．19×10。7)。另外发现miR．933的SNP位点 r基因型与肝癌和乙肝相关性肝癌易感性不具有相关性。 其次，在miRNA SNP与miRNA表达量的研究中发现，miRNAl269a(GA．AA) 肝癌患者的miRNAl269a的表达水平较miRNAl269a(GG)水平略低，少量肝癌患 者血浆内miRNAl269a的表达水平无统计学差异(P=0．3802和P=0．0537)，然而将 miRNAl269a及miRNAl269a SNP的前体质粒转染入肝癌细胞系后测得的 miRNAl269a的表达水平存在显著性差异(P0．01)。在最后对miRNA SNP靶基 因的研究显示在mRNA水平验证了miRNAl269a rGA)在肝癌发生 中的两个预测靶基因分别为SPATS2L和LRP6。 结论： 在此次723vs698例病例对照研究中我们阐明了miRNAl269a中 rGA)与肝癌发生风险之间存在关联，并作为风险性因素起作用。而 在转录水平，miRNAl269a中rGA)的过表达导致SPATS2L和LRP6 的表达量下调，提示二者可能是miRNAl269a r生作用的靶基因。 关键词：miRNAl269a．SNP肝癌易感性 万方数据 AbstractAbstract Abstract Abstract Backgr