HGF基因染骨髓间充质干细胞源性脂肪细胞与PLGA构建组织工程脂肪的实验研究.docx

兰州大学硕士研究生学位论文 可以在诱导体系下向脂肪细胞和成骨细胞分化；2．以100pfu／cellAd．GFP转染脂 肪细胞72h后，绿色荧光蛋白表达量达高峰，此时转染效率为65．39％；以 100pfu／cellAd．HGF转染脂肪细胞72h后，肝细胞生长因子的表达量为峰值 91．62ng／106cells；与未转染空白对照比较，转染后24，48，72，96，168h脂肪 细胞活性均无明显变化；3．转染3、7、14d时，B组移植物中HGF的表达高于 其他组(P(O．05)，且3d达到高峰。3、7、14、28、60d时B组移植物中血管 生成高于其他组(P(0．05)，且7d血管增加的幅度最大。28、60d时B组坏死 程度均小于其他组，电镜显示脂肪细胞也多于其他组。 结论：1．骨髓问充质干细胞具有其特殊的生物学特点，体外能向成脂和成骨诱 导分化，可作为组织工程脂肪中脂肪细胞的来源细胞；2．重组腺病毒可介导肝 细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞源性的脂肪细胞，有效表达目的蛋白， 且转染该基因不影响脂肪细胞的活性；3．可以利用携带有肝细胞生长因子基因 的脂肪细胞与PLGA构建组织工程脂肪并进行移植，移植物所表达的HGF能够 促进移植组织的血管生成，促进组织工程脂肪的成活。 关键词：腺病毒；肝细胞生长因子；转染；骨髓间充质干细胞；脂肪细胞；PLGA； 组织工程脂肪；基因治疗；脂肪移植  兰州大学硕士研究生学位论文 _———————————————————————————————————————————————————————一 Experimental study on tissue englneerlng adipose constructed by adipose cells derived from mesenchymal stem cells transfected with human HGF gene and PLGA Candidate master：LIU Jie-ring Tutor： LIU Yi Institude： CHEN Ke—ming，HA Xiao·qin Abstract Objective：1．To investigate the biological characteristics of mesenchymal stem cells· 2．To discuSS the transfer efficiency，HGF expression and the influence on bioactivity in MSCs．derived adipose cell via a recombinant adenovirus carrying human hepatocyte growth factor gene(Ad—HGF)．3．To study the feasibility about tissue engineer adipose grafts，which was constructed by adipose cells transfected HGF gene and PLGA，and the effect of HGF on survival of those． Methods：1．The MSCs of the Wistar rats were isolated with density gradient centrifugation，observed cell generation cycle by flow cytometry and induced to differenfiate into adipose cells and osteoblast．2．The 3rd passage MSCs were induced to differentiate into adipose ceils。They were transfected with Ad-GFP(the recombinant adenovirus carrying green fluorescence protein gene)at the different MOI(50，1 00，1 50，200)．At 48，72，96h after transfecting，the transfer efficiency was evaluated by flow cytometry and the best M01 would be found out．The adipose cells were transfected with Ad—HGF at the best MOI．HGF expres