IL-17对小鼠结癌肿瘤组织中细胞因子表达及CD4+T细胞亚群分布的影响.docx

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IL-17对小鼠结癌肿瘤组织中细胞因子表达及CD4T细胞亚群分布的影响

河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学, 试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所 有。否则,承担相应法律责任。 研究生签名:孺 导师签章:懈级学院领导盖章: 加心年J,月1日 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果, 除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经 发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人 独立撰写,文责自负。 研究生签轹蠕 导师签章:翮 僻r月7日 万方数据 目 录 中文摘要 ·1 英文摘要 5 研究论文IL—17在小鼠结肠癌发生发展中的作用 前言月U舌 .1’l 0U 材料与方法 ··1l 结果 ··23 附图 ··26 附表 ··36 讨论 ..39 结论 ... 42 参考文献 ··43 综述IL.17对肿瘤微环境的影响 ..45 致谢 ..52 个人简历 ..53 万方数据 中文摘要 IL.17在小鼠结肠癌发生发展中的作用 摘 要 目的:结肠癌是临床上常见的消化道肿瘤之,’,好发于50~60岁人 群,占所有癌症的第三位。【l,2】随着经济的高速发展,人们的生活水平不 断提高,由此带来的饮食结构改变,如少纤维多脂肪,使得该病的发病率 在全球范围内呈现逐年升高趋势。13]目前对于结肠癌的治疗仍以手术作为 首选方式,术后或术前结合化学治疗等辅助方法取得,。定效果,但是其5 年生存率低耐药性强等诸多因素,【4J促使我们亟待寻求更为有效的治疗手 段。上个世纪80年代,肿瘤的生物治疗问世,至今已经成为第四种肿瘤 治疗方法,而其中的免疫治疗为最常用的方法之一一。【5】免疫疗法就是通过 增强人体免疫力,调整机体抗瘤能力,达到抑制肿瘤的发生、发展及转移。 细胞因子是一类具有多种生物学效应的小分子蛋白,其家族成员很多在肿 瘤的发生、发展中起到重要作用,【6】因此细胞因子治疗已成为肿瘤免疫治 疗的常用手段之一。IL.17作为Thl7细胞的特征性细胞因子,其在肿瘤 t}l的作川引起厂我们的兴趣,前期研究结果显示接种C26/pcDNA3.1.IL一1 7 细胞的小鼠移植瘤体积明显小于接种C26细胞和C26/pcDNA3.1细胞的小 鼠移植瘤大小,这说明IL.17可以抑制肿瘤的生长,但是IL.17并不影响 各组小鼠的生存期。因此,本研究将对IL.17在结肠癌发生发展中的作用 进行深入研究,并探讨其抗瘤机制。 方法: 1荷瘤小鼠脾细胞亚群分布检测 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠脾脏,利用密度梯度离 心法分离脾淋巴细胞,分别提取各组脾淋巴细胞的RNA,Real.Time PCR 法检测与各Th细胞相关的特征性细胞因子和转录因子的表达。 2 IL.17对肿瘤组织中淋巴细胞浸润情况检测 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定后 制备蜡块,切片后HE染色法观察接种C26/pcDNA3.1.IL.17细胞的小鼠 肿瘤组织与接种C26/pcDNA3.1细胞和接种C26细胞的小鼠肿瘤组织中淋 巴细胞浸润数量的区别。 万方数据 中文摘要 3 IL.1 7对肿瘤组织中血管密度影响情况检测 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定后 制备蜡块,切片后免疫组化法标记血管,对比三组荷瘤小鼠肿瘤组织中血 管数量。 4荷瘤小鼠肿瘤组织中相关细胞因子检测 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,Real.Time PCR法和Western blot法 检测肿瘤组织中相关细胞因子的表达情况。 5荷瘤小鼠肿瘤组织中Thl,Th2,Thl7,Treg细胞特征性转录因子 的表达情况检测 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,分别取各组小鼠肿瘤组织,Real.Time PCR法分别检测Thl、Th2、Thl7、Treg细胞的特征性转录因子。 6 IL.17对肿瘤细胞凋亡情况研究 荷瘤小鼠接种肿瘤细胞后35天,取各组小鼠肿瘤组织,甲醛固定制 备蜡块,切片后TUNEL法检测各肿瘤组织中凋亡细胞数量。 结果: 1 IL.17影响荷瘤小鼠脾细胞亚群分布研究 Real.Time PCR法检测结果显示,与接种C26、C26/pcDNA3.1的荷 瘤小鼠相比,IL.17可以使接种C26/pcDNA3.1.IL.17细胞的荷瘤小鼠脾 淋巴细胞中ROR.矿细胞、IFN.丫+细胞、Th2+细胞和IL.10+细胞细胞增多 (尸O.05),同时IL.17+细胞、T-bet+细胞和Foxp.3+细胞

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