FLT3LGMCSF对DC细胞的体外刺激以及DCCI体外培养方法的研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则， 承担相应的法律责任。 研究生签名：纽书导师签名．1蠢尖学院领导签名{璧鬻’；I ，V年2，月’·F3簪怎毒■’ 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文Fh本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：荔廷舶夕导师签名：I表丈． 口9年≥ 月7。 日 中文摘要FLT3 中文摘要 FLT3．L／GM．CSF对DC细胞的体外刺激以及 DC．CIK体外培养方法的研究 摘 要 目的：随着细胞免疫学和分子生物学的发展，细胞免疫 治疗已在临床实验中开展，并取得一定的疗效。细胞因子诱 导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，简称CIK)作 为一种新型免疫活性细胞，已经用于多种恶性肿瘤的过继免 疫治疗中。树突状细胞(dendritic cells，简称DC)是迄今发现 的功能最强的抗原提呈细胞(APC)，它通过处理、提呈抗原 而介导机体免疫反应。由于很多肿瘤宿主缺乏功能性DC而 不能诱发抗原特异性T细胞免疫应答，故如何在体外诱导功 能性DC用于主动免疫治疗，具有重要临床意义。研究报道， FLT3配体(FLT3．L)作为一种细胞因子，可以成功诱导成 熟DC的生长，并且诱导浆细胞样DC的生长，增加DC的 数量，增强DC的特异性。作为经典的DC诱导刺激因子， GM．CSF在DC培养中的作用已得到肯定。本研究旨在探讨 相同剂量的FLT3．L和GM．CSF在诱导成熟DC的体外培养 过程中的作用，以及不同的DC．CIK共培养方式诱导的成熟 CIK的特异性免疫表型表达以及对肿瘤细胞杀伤活性的差 异，从而为临床DC．CIK治疗提供参考。 方法：实验的第一部分：细胞取自正常人外周血单个核 细胞。使用FLT3．L诱导DC成熟组作为实验组，GM—CSF 诱导DC成熟组作为对照组，分离外周血贴壁细胞培养DC， 隔日添加细胞因子，并按计划分别于培养过程中行流式细胞 中文摘要学检查分析不同的细胞因子诱导 中文摘要 学检查分析不同的细胞因子诱导DC的免疫表型的差异。实 验的第二部分：细胞来源有两种：EBV感染所致的噬血细胞 综合症患者的外周血单个核细胞、AML．M4缓解期患者的外 周血单个核细胞。EBV感染噬血细胞综合症患者DC培养过 程中加入EBV抗原肽后与CIK共培养，比较是否可以培养 出克隆性增强的CIK，从而提高CIK的抗瘤活性。AML．M4 缓解期患者分别使用FLT3．L／GM．CSF两种细胞因子诱导培 养成熟DC，同时培养CIK细胞，待DC培养成熟后加入CIK， 进行DC．CIK共培养。培养前后DC分别进行细胞计数、行 流式细胞学检查；培养前后CIK分别进行细胞计数、流式细 胞学检查、基因扫描图谱分析、杀伤实验。通过一系列的实 验分析，选择DC．CIK的最佳培养方案。 结果： 1关于两种细胞因子对正常人DC诱导培养的影响 实验组与对照组细胞数均随细胞培养时间的延长逐渐 减少，两组间数值无明显差异。培养前各组细胞总数2．00± 0．10×101，培养第3天细胞计数FLT3．L组1．104-0．04×10 7， GM．CSF组1．20±O．03×107，培养第7天计数：FLT3一L组 O．80±O．04×107，GM．CSF组O．80±0．02×101，培养第10 天计数：FLT3．L组0．60±O．02×10 7，GM—CSF组0．53±O．01 ×107。 流式细胞学分析，培养前CDl4+细胞11．41％，CD83+细 胞0．28％，CD80+细胞O．01％，CD86+细胞1．32％，CD4十CDl23+ 细胞1．23％；FLT3．L培养后CDl4+细胞49．22％，CD83十细胞 6．96％，CD80+细胞33．48％，CD86+细胞52．05％，CD4十CD 1 23十 细胞4．25％；GM．CSF培养后CDl4+细胞72．21％，CD83十细 胞2．90％，CD80+细胞41．23％，CD86十细胞68．3 1％， 中文摘要CD4+CDl23+ 中文摘要 CD4+CDl23+细胞1．16％；培养后成熟的DC细胞增多，比较