JAKSTT5信号通路在Th17细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究.docx

全文小结 全文小结 75 本课题的创新点及展望 ．．76 附录 77 综述 ．79 论文和学术情况 99 致谢 ．．1 00 万方数据 资助项目国家自然科学基金地区科学基金项目Thl7细胞参与调控中性粒细胞 资助项目 国家自然科学基金地区科学基金项目Thl7细胞参与调控中性粒细胞 性哮喘气道炎症的分子机制研究(NO 81 160005) 万方数据 JAK／STAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究 JAK／STAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究 博士学位论文 JAK／STAT5信号通路在Thl 7细胞介导的中性 粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究 摘要 支气管哮喘(简称哮喘)是一种危害人类健康的常见的慢性气道炎症性 疾病。目前认为哮喘是由气道的炎性细胞与结构细胞等多种细胞包括和细 胞组分参与的气道慢性炎症性疾病，并伴随气道的高反应性。气道慢性炎 症是哮喘的本质，随着研究的进展，人们认识到哮喘的气道炎症存在不同 的亚型，可分为嗜酸细胞性哮喘(eosinophilic asthma，EA)和非嗜酸细胞 性哮喘(non．eosinophilic asthma，NEA)，我们课题组前期研究证实其中中 性粒细胞性哮喘(neutrophilic asthma，NA)占非嗜酸细胞性哮喘半数以上。 哮喘发病机制复杂，至今尚未完全清楚。较多研究表明，CD4+T淋巴细胞 调控支气管哮喘气道炎症中起着关键作用。ThVTh2细胞比例和功能的失衡 即Th2优势化，被证实是过敏性哮喘的标志。但研究发现非特应性哮喘患者 可表现为非Th2型气道炎症。因此，该理论不能完全解释哮喘全部的临床及 病理生理改变。 为了进一步探讨中性粒细胞哮喘的发病机制，本课题组已成功建立了 中性粒细胞哮喘小鼠模型，动物实验研究结果显示Thl7细胞通过IL．17介 导哮喘小鼠中性粒细胞性气道炎症的发生，NAd鼠存在强烈的Thl 7细胞 免疫。并且用流式细胞术检测发现NAd鼠脾脏Thl7细胞Ki．67蛋白表达增 高，提示NAd鼠Thl7细胞维持持续存活的状态。Thl7细胞持续存活是导致 NAd鼠Thl7细胞优势的一个重要机制。目前尚无NAd鼠Thl7细胞持续存 活的机制研究，有待进一步深入研究，为治疗NA提供新的靶点。这是本课 题所要研究的第一个问题。 万方数据 JAKISTAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究目前主要使用吸入糖皮质激素治疗哮喘。糖皮质激素具有抗炎作用， JAKISTAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究 目前主要使用吸入糖皮质激素治疗哮喘。糖皮质激素具有抗炎作用， 能够有效控制大部分轻度和中度哮喘患者的病情，然而有小部分病人对糖 皮质激素反应不佳。研究发现，这部分患者其中大多数是中性粒细胞性哮 喘，需要较大剂量的激素才能控制症状。糖皮质激素有一定的局限性，如 果全身较大剂量的应用会引起一定的毒副作用。研究人员曾尝试许多新的 治疗方法，但是到目前为止均未成功运用到临床。我们前期实验证实Thl7 细胞在NAd,鼠发病中起着重要的作用。针对Thl7细胞的靶向治疗也成为目 前研究的热点。JAK／STAT信号通路参与调控Thl7细胞分化，存活和增殖。 那么，抑制JA刚SL虹信号通路是否能影响NAdx鼠的中性粒细胞气道炎症? 本课题研究第二部分采用了JAK／STAT信号通路抑制剂AG490干预Thl 7细 胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠，了解其对中性粒细胞气道炎症的影响及进 行相关机制的探讨，为NA的治疗寻求新线索及提供理论依据。研究分为两 部分进行： 万方数据 JAK／STAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究第一部分 JAK／STAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞哮喘小鼠模型中作用的研究 第一部分 JAK／STAT5信号通路在Thl7细胞介导的中性粒细胞性哮喘小鼠模型 中的作用 目的探讨JAK／STAT5信号通路参与调控Thl7细胞存活及凋亡的相关 机制 方法NA组小鼠于第0、6、13天予100pg卵蛋白(OVA)、O．1l-tg脂 多糖(LPS)经气道滴入致敏。于第21天起连续14天雾化吸入l％OVA激 发，每次60min，连续雾化3天。NC组不做任何处理。处死小鼠后，用磁 珠纯化的小鼠脾源。[生CD4+T，在外源性IL．7以及STAT5抑制剂的作用下，采 用流式细胞术检测已分化的Thl7细胞占CD4+T细胞的比例以及Thl7细胞上 Ki．67、Bcl一2、p-STAT5以及活化型Caspase3表达。 结果在体外，在IL．7作用后NAd,鼠Thl7细胞上Ki一67和Bcl一2比例高于 空白对照组(；LSJP0