lincRNAUFC1在肝癌发生发展中的作用及机制的探讨.docx

㈣㈣m㈣㈣0Y31 ㈣㈣m㈣㈣0 Y31 16520 博士学位论丈 lincRNA．UFCl在肝癌发生发展中的作用 及其机制的探讨 博士研究生：曹传辉 指导教师：吴德华 摘要 研究背景及目的 原发性肝癌(primary liver cancer，PLC)是世界上常见的恶性肿瘤之一， 90％以上为肝细胞肝癌(hepatocelluar carcinoma，HCC)，在男性中，其发病 率占恶性肿瘤发病率的第二位，在女性中，其发病率占恶性肿瘤发病率的第 六位；据必威体育精装版统计，全球每年新发病例达到782500，因肝癌死亡的患者人数 达到745500，病死率达到95％。我国肝癌发病人数占世界发病人数的50％， 因此肝癌己成为威胁我国人民健康和生命的～大杀手。 快速增殖是肝癌重要的生物学特点之一，肝癌的快速增殖是导致许多肝 癌患者预后较差，5年生存率低的重要因素之一。因此，研究导致肝癌快速 增殖的原因，揭示肝癌快速增殖的分子机制对提高肝癌患者预后有着极其重 要的作用。 长链非编码RNA(10ng non，coding RNA，lncRNA)是广泛存在于真核生 物中的一类本身不编码蛋白、转录本长度超过200nt的RNA分子，可以在 多种层面上(表观遗传调控、转录调控及转录后调控等)调控基因的表达水 平。按其与mRNA之间的位置关系大致分为五种类型：(1)正义长链非编码 RNA(2)反义长链非编码RNA(3)双向长链非编码RNA；(4)内含子型长链 非编码RNA；(5)基因间长链非编码RNA(即large intergenic noncoding RNA， lincRNA)。在整个基因组转录产物中，IncRNA所占的比例远远超过mRNA 万方数据 摘要的比例。对于lncRNA的鉴定使我们对整个功能性基因调控方式进行了重新 摘要 的比例。对于lncRNA的鉴定使我们对整个功能性基因调控方式进行了重新 解读，通过研究IncRNA的生物学功能及其在疾病中的调控机制，能够更全 面的理解疾病的发生机理，寻找新的疾病诊断标志物以及治疗靶点。 本研究首先应用lncRNA芯片技术筛选出在肝癌与对应癌旁组织中差异表 达的lncRNA，然后利用qRT-PCR技术检测所筛选出的lncRNA在新鲜肝癌组织 及对应癌旁组织中的表达，最终靶定lincRNA。UFCl进行深入研究。接下来本研 究利用原位杂交、体内外功能实验、RIP及RNA pull．down等实验明确了 lincRNA．UFCl在肝癌中的生物学作用，阐明了其在肝癌发生发展过程中的作用 机制，为进一步寻找肝癌早期诊断、预后判断、确定治疗决策的新的分子标志 物及靶向治疗提供了理论依据。 方法 1、lncRNA芯片技术筛选肝癌及癌旁组织中差异表达的lncRNA。 利用Arraystar的lncRNA与mRNA芯片技术筛选7对肝癌组织及其配对癌 旁组织中的IncRNA及mRNA表达谱，使用独立样本f检验筛选出在肝癌组织 与癌旁组织中差异表达lncRNA与mRNA，随机挑选出几个筛选出的差异表达 lncRNA与mRNA，利用qRT．PCR的方法检测其在10对肝癌组织及其配对癌旁 组织中的表达，验证是否与芯片结果一致，对芯片的结果进行验证。然后扩大 样本量，利用qRT．PCR的方法检测49对新鲜肝癌组织及配对癌旁组织中lncRNA 的表达，利用独立样本t检验分析lncRNA在肝癌组织与癌旁组织中有无表达差 异。 2、lincRNA．UFCl在肝癌组织中的表达及在肝癌忠者预后中的意义。 利用qRT．PCR方法检测49对新鲜肝癌组织及配对癌旁组织中 IincRNA-UFCl的表达，采用独立样本t检验分析lincRNA．UFCl在肝癌组织与 癌旁组织中表达有无差异。利用原位杂交技术检测131例肝癌石蜡标本及72例 癌旁组织石蜡标本中lincRNA—UFCl的表达，并对染色结果进行评分，利用卡方 检验分析IincRNA．UFCI在肝癌组织及癌旁组织中表达有无差异。采用Spearman II 万方数据 博士学位论文秩相关分析lincRNA．UFCl的表达与肝癌患者各临床病理参数之间的相关性；应 博士学位论文 秩相关分析lincRNA．UFCl的表达与肝癌患者各临床病理参数之间的相关性；应 用Kaplan．Meier生存分析法与log-rank检验分析lincRNA-UFCl对肝癌患者预后 的影响；运用Cox比例风险回归模型对各肝癌患者各临床病理参数、 lincRNA．UFCl的表达与肝癌患者预后的关系进行单因素与多因素分析，明确 lincRNA．UFCl是否可以作为肝癌发病的独立风险因素。 3、lincRNA．UFCl在肝癌中的生物学作用。 首先利用qRT．PCR方法检测lincRNA．UFC 1在肝癌细胞中的表达水平，筛 选